hepaCAM在肾癌中表达及对肾癌细胞侵袭力的影响

摘要

第一部分 目的：探讨肝细胞粘附分子（hepatocyte cell adhesion molecule，hepaCAM）在肾癌中的表达及临床意义。 方法：采用逆转录PCR（RT-PCR）方法检测6例正常肾组织和30对肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAMmRNA表达，分析其与肾脏病理学特征的关系。 结果：hepaCAMmRNA在6例正常肾组织均呈现高表达；而在30例癌组织中hepaCAM的表达显著低于癌旁组织（P<0.01），且其表达和肾癌分级、分期无显著相关性（P>0.05）。 结论：hepaCAM基因在正常肾脏组织中高表达，在肾癌组织中呈低表达（或不表达），且不能用于评价肾癌的分级分期。 第二部分 目的：hepaCAM基因真核表达载体pEGFPN2/hepaCAM及空载体pEGFPN2的鉴定，观察转染后hepaCAM在786-0细胞中定位，获得稳定表达hepaCAM的786-0细胞株。 方法：将携有hepaCAM基因的重组真核表达载体pEGFPN2/hepaCAM经BamHⅠ/HindⅢ双酶切及序列鉴定，转染786-0细胞株，荧光显微镜计算脂质体转染细胞效率并观察hepaCAM蛋白786-0细胞的定位。G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞，RT-PCR检测mRNA表达水平。 结果：获得含有hepaCAM基因的真核表达载体，建立稳定、高效转染786-0细胞的方法。重组质粒转染786-0细胞的最佳转染时间为48h，最合适质粒与脂质体的比例为1：2。荧光显微镜显示：hepaCAM主要定位于细胞质和细胞核周区域及突起表面，呈现典型细胞粘附分子特性。筛选出稳定表达hepaCAM的786-0细胞，检测到高表达的hepaCAM基因。 结论：重组质粒能够有效稳定转染786-0细胞株，为进一步研究hepaCAM在RCC细胞中侵袭活性奠定了基础。 第三部分 目的：探讨hepaCAM基因导入对肾癌细胞侵袭活性的影响。 方法：MTT法及软琼脂克隆形成实验观察其对肾癌细胞生长抑制作用；RT-PCR方法检测MMP2和MMP9mRNA的表达，明胶酶谱法检测MMP2和MMP9活性的变化，Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。 结果：MTT显示hepaCAM基因抑制细胞成活率在4、5、6天分别为26.5％、38.1％、35.7％（P<0.01）；克隆形成实验显示当hepaCAM基因转染786-0细胞后，细胞克隆数减少5倍；MMP2及MMP9mRNA表达和酶活性明显受抑制（P<0.05）；hepaCAM基因的导入显著减弱了肾癌细胞跨膜侵袭能力（P<0.01）。 结论：hepaCAM基因稳定转染到786-0细胞可能通过下调MMP2及MMP9的表达、抑制明胶酶的活性、抑制细胞生长进而抑制肾癌细胞786-0侵袭力。因此，候选抑癌基因hepaCAM可能为肾癌生物学治疗提供新的分子靶点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前 言

技术路线图

第一部分 hepaCAM在RCC中表达及其临床意义

1材料

2方法

3结果

4讨论

第二部分 hepaCAM基因真核表达载体鉴定及其在肾癌细胞中表达

1材料

2方法

3结果

4讨论

第三部分hepacAM基因转染对786-O细胞侵袭力的影响

1材料

2方法

3结果

4讨论

全文总结

参考文献

全文附图

文献综述：hepacAM研究进展

致谢

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