生物被膜肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的耐药性和基因型分析

摘要

目的： 研究临床分离的肺炎克雷伯菌（KP）在体外形成生物被膜（BF）的情况，检测生物被膜KP中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的产生，分析并探讨其耐药性和耐药基因的分型。 方法： 1、采用改良平板法在体外建立KP生物被膜模型，在普通光镜和扫描电镜下进行观察与鉴定；采用结晶紫染色法对形成的BF进行定量分析，并对形成BF的菌株就其标本种类进行统计学分析。 2、用三维试验对建立BF模型的KP菌株中ESBLs的产生情况进行检测。 3、将产ESBLs的生物被膜KP归为B组，浮游状态下的相应菌株归为A组。用K-B法对两组细菌进行药敏试验。 4、用聚合酶链反应（PCR）对B组中的细菌进行blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因扩增，将产物分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列，分析其基因亚型。 结果： 1、临床分离的60株ESBLs阴性KP有46株在体外成功建立了BF模型。定量分析之后对其粘附性及生物被膜形成能力进行划分，结果表明弱阳性（+）为7株（15.2％），中等阳性（++）为15株（32.6％），强阳性（+++）为24株（52.2％）。对BF形成菌株就其标本种类进行X2检验：不同种类的标本构建成功率相似，P>0.05，无统计学差异。 2、46株生物被膜KP经过三维试验检出9株（19.6％）ESBLs为阳性。 3、药敏试验结果表明A组中的KP对头孢呋辛、头孢他啶耐药性较高，对头孢噻肟敏感性较低，对头孢曲松和氨曲南则较敏感。而B组中的细菌对以上药物均表现出高度耐药。 4、经PCR扩增，B组中9株（100％）细菌均扩增出SHV型基因，没有单独扩增出TEM和CTX-M基因。但有4株（44.5％）细菌中同时存在SHV型和TEM型基因。 5、对B组细菌基因扩增产物进行TA克隆后测序，经BLAST进行同源性比较有1株属于SHV-5型，5株属于SHV-12型，3株属于SHV-28型。TEM型均为TEM-1型。 结论： 1、绝大多数临床分离的ESBLs阴性KP具有粘附性及生物被膜形成能力，且以强阳性为多数。 2、与其浮游状态相比，KP在BF状态下更容易产生ESBLs。 3、BF的形成和产生ESBLs的协同作用是生物被膜肺炎克雷伯菌耐药性增强的主要原因之一。 4、生物被膜对肺炎克雷伯菌SHV-1型基因是否具有诱导突变作用，还有待进一步研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前言

第一部分 肺炎克雷伯菌生物被膜的体外模型建立

1实验材料

2实验方法和步骤

3实验结果

第二部分生物被膜肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的筛选和耐药性

1实验材料

2实验方法与步骤

3实验结果

第三部分 生物被膜肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的基因分析

1实验材料

2实验方法与步骤

3实验结果

讨 论

全文小结

参考文献

附 图

文献综述生物被膜细菌的耐药机制及其防治

致 谢

攻读硕士学位期间研究成果