肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶与AmpC酶的耐药表型及基因型分析

摘要

目的：肺炎克雷伯菌是临床感染的常见致病菌之一，近年来由于产酶株的流行蔓延使其耐药性大大增强、二次感染机率大，成为流行病学研究和防治工作中的难题。本课题对临床收集的肺炎克雷伯菌从细菌学分析、抗菌药物敏感性试验以及超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase，ESBLs)与质粒介导AmpC酶的分子生物学分类等方面进行研究，探讨本地区肺炎克雷伯菌流行病学特性，为临床肺炎克雷伯菌感染的鉴定和治疗提供可靠依据。 方法：1、临床标本的细菌学分析：本试验收集淄博地区2007年6月-2008年8月临床送检的血液、尿液、痰、胸腹水、分泌物等感染性标本。常规操作进行细菌培养，采用英国SENSITITRE ARIS荧光快速微生物鉴定/药敏分析系统进行鉴定。2、抗菌药物敏感试验：根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B法检测肺炎克雷伯菌各菌株对常用抗菌药物的敏感性。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测：根据药敏结果初筛产ESBLs和AmpC酶菌株，经CLSI/NCCLS纸片确认试验检测ESBLs，三维确认试验检测质粒介导AmpC酶。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析：运用聚合酶链反应(PCR)技术，以多组引物扩增产酶株的质粒DNA，通过扩增产物的电泳图谱分析ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型。 结果：1、临床标本的细菌学分析：本实验共检出淄博地区非重复的肺炎克雷伯菌68株。2、抗菌药物敏感试验：实验结果显示，肺炎克雷伯菌主要对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦和头孢吡肟敏感性较高，而对三代头孢类抗生素高度耐药。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测：从68株肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs阳性株20株、产质粒介导AmpC酶阳性株3株、二者均阳性2株，分别所占比例为29.4％、4.4％和2.9％。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析：运用PCR技术可快速精确地分析两种酶的基因型，结果ESBLs主要为TEM型和CTX-M型，AmpC酶以DHA型为主。 结论：1、临床标本的细菌学分析：应用常规细菌分离培养方法即可获得肺炎克雷伯菌的纯生长，应用荧光快速微生物鉴定/药敏分析系统可实现细菌的快速准确鉴定。2、抗菌药物敏感试验：本实验选用NCCLS推荐的K-B法对肺炎克雷伯菌进行药物敏感性试验，该实验方法成熟、技术完善、并建立了各药物敏感性判定标准，结果准确可靠，能更好地服务于临床。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测：本实验选用NCCLS推荐的纸片确认试验和三维试验分别检测ESBLs和质粒介导AmpC酶，准确率较高，误差小；缺点是三维试验操作较繁琐，有待于进一步改进优化。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析：运用PCR和电泳的方法鉴定ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型，对致病菌区域性流行和耐药机制的研究具有实际意义，有利于进行细菌流行病学监测，有利于指导临床合理用药。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章实验材料

一、实验菌株

二、主要实验仪器设备

三、主要实验试剂

四、质控菌株

第二章实验方法

一、标本采集

二、细菌培养

三、基本形态

四、药敏试验

五、 ESBLs与AmpC酶的表型检测

六、提取质粒DNA(碱裂解法)

七、 PCR扩增

八、电泳分析

九、结果与统计学处理

第三章实验结果

一、细菌培养结果

二、 ESBLs与AmpC酶表型检测结果

三、药敏结果

四、 PCR及电泳结果

第四章 附图

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

综述 肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶和ESBLs的研究进展

在学期间的研究成果及发表的论文

致谢