不同剂量照射对宫颈癌细胞PIWIL2蛋白表达及部分生物学指标影响的研究

摘要

目的：探讨不同剂量X线照射对宫颈癌Hela细胞PIWIL2蛋白表达及HPV病毒、细胞凋亡、细胞周期分布变化的影响，并分析照射后宫颈癌Hela细胞PIWIL2蛋白表达与HPV病毒、细胞凋亡和细胞周期分布变化的相关性。　　方法：　　（1）宫颈癌Hela细胞的培养：以含10％胎牛血清的 DMEM高糖培养基，置于CO2浓度为5%、温度为37℃、饱和湿度的恒温培养箱培养，细胞培养至对数期进行实验处理。　　（2）分组及X线照射：设置对照组（0Gy组）、2Gy组、4Gy组、8Gy组，采用6MV X线直线加速器照射，照射距离100cm，剂量率400cGy/min，分别给予剂量0Gy、2Gy、4Gy、8Gy照射。　　（3）克隆集落形成实验：取对数期Hela细胞计数后接种于培养皿中，按分组及照射条件照射后继续培养14天进行染色计数克隆集落形成率及细胞存分数。　　（4）细胞周期及凋亡检测：将Hela细胞培养至对数期，按分组及照射条件照射后继续培养，采用流式细胞仪分别检测照射后6、12、24、48小时细胞周期分布及细胞凋亡率。　　（5）Western blot及荧光定量PCR法检测PIWIL2及HPV-18 E6/E7的表达：将Hela细胞培养至对数期，按分组及照射条件照射后继续培养，分别检测对照组及各实验组放疗后6、12、24、48小时PIWIL2及HPV E6/E7表达情况。　　结果：　　（1）各实验组在照射后48小时内PIWIL2蛋白的表达随时间推移呈先增加后降低，2Gy组PIWIL2表达峰在照射后6小时，4Gy组和8Gy组在照射后12小时；Hela细胞照射后6小时各实验组PIWIL2表达水平上调，但随照射剂增加上调作用逐渐下降，上调作用与照射剂量呈负相关（r=－0.898，P＜0.05），X线照射后12~48小时宫颈癌Hela细胞PIWIL2表达呈剂量依赖性增加。　　（2）X线照射后Hela细胞存活分数与照射后6小时PIWIL2表达水平呈正相关（（r=0.921，P＜0.05），与照射后其它时间点PIWIL2表达无相关性（P＞0.05）。　　（3）与对照组比较，各实验组照射后G2/M期比例随时间推移先增加后降低，2Gy组G2/M期阻滞峰在照射后6小时，4Gy组和8Gy组在照射后12小时；X线照射后G2/M期比列与PIWIL2蛋白表达水平随时间变化趋势一致，两者呈正相关（2Gy组r=0.896，P＜0.05；4Gy组r=0.903，P＜0.05；8Gy组r=0.873，P＜0.05）。　　（4）照射后48小时内随时间推移各实验组18型HPVE6/E7的表达均呈降低—增加—降低的趋势，2Gy和4Gy组照射后12、24小时其表达水平高于对照组（P＜0.05），其余时间点及8Gy组各时间点18型HPVE6/E7表达均显著受抑制（P＜0.05），照射后6、48小时小时18型HPVE6/E7表达呈剂量依赖性降低；照射后48小时内18型 HPVE6/E7表达水平与PIWIL2的表达水平均无相关性（P＞0.05）。　　（5）2Gy和4Gy组X线照射后24小时内在各时间点的细胞凋亡率高于对照组（P＜0.05），与X线照射后24小时内PIWIL2表达呈负相关（2Gy组r=－0.671，P＜0.05；4Gy组r=-0.783，P＜0.05）；8Gy组X线照射后48小时内细胞凋亡率均高于对照组（P＜0.05），与照射后48小时内 PIWIL2表达呈负相关（r=－0.595，P＜0.05）。　　结论：　　（1）X线照射后48h内Hela细胞PIWIL2蛋白表达水平上调，随时间推移其表达水平先增加后降低，2Gy组表达峰值在照射后6h，4Gy和8Gy组在照射后12h。　　（2）X线照射能抑制Hela细胞HPV18型E6/E7的表达，抑制作用呈剂量依赖性增加，但在4Gy以下剂量照射后12~24小时E6/E7表达明显增高；X线照射后Hela细胞HPV18型E6/E7的表达与PIWIL2表达无相关性。　　（3）X线照射后Hela细胞PIWIL2表达水平与G2/M期阻滞比例、细胞存活分数呈正相关。　　（4）X线照射后Hela细胞PIWIL2表达与细胞凋亡呈负相关。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 图像分析及数据统计学处理

结果

1 不同剂量X线照射后Hela细胞PIWIL2蛋白表达变化

2 不同剂量照射后Hela细胞HPV E6/E7蛋白的表达情况

3 不同剂量照射后Hela细胞克隆集落形成率与PIWIL2的表达关系

4 不同剂量X线照射后Hela细胞细胞周期分布及与PIWIL2表达关系

5 X线照射后Hela细胞凋亡及与PIWIL2表达关系

讨论

1 PIWIL2与肿瘤的关系

2 X线照射对宫颈癌Hela细胞PIWIL2蛋白表达及HPV病毒的影响

3 不同剂量X线照射后宫颈癌细胞PIWIL2表达与细胞周期分布的关系

4 X线照射后Hela细胞PIWIL2表达与细胞存活的关系

5 PIWIL2抑制肿瘤细胞凋亡

结论

参考文献

中英文缩略词对照表

致谢

综述:PIWIL2与肿瘤干细胞放射拒抗性的研究进展

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