新生儿ABO溶血病患儿血中胆红素对单核细胞TLR4、NF-κB蛋白和IL-12表达的影响

摘要

目的：探讨新生儿ABO溶血病患儿血中不同浓度的胆红素对单核细胞 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12表达的影响。方法：选择在2015年9月1日至2016年2月29日期间入住四川省人民医院本部及城东病区、龙泉驿区妇幼保健院的新生儿，包括新生儿 ABO血型不合溶血症、新生儿暂时性呼吸增快（湿肺）、新生儿低血糖症、新生儿低钙血症、新生儿咽下综合征作为研究对象。所有对象需符合下列标准：胎龄37～42周、出生体重2500～4000 g、Apgar评分正常、羊水清。研究对象根据是否发生溶血分为溶血组和非溶血对照组，溶血组按胆红素的浓度分为轻度溶血组（TBIL＜220.6μmol/L）、中度溶血组（TBIL为220.6～307.8μmol/L）和重度溶血组（TBIL≥307.8μmol/L）。患儿入院时经股静脉穿刺取静脉血2ml，用于提取单个核细胞。采用流式细胞技术区分单个核细胞中淋巴细胞群和单核细胞群，并检测单核细胞群中溶血组和非溶血对照组 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12表达情况。溶血组经丙种球蛋白治疗后取静脉血2ml提取单个核细胞，采用流式细胞技术区分淋巴细胞群和单核细胞群，并检测单核细胞群中 TLR4、 NF-κB蛋白和 IL-12的表达情况。结果：1.根据纳入、排除及中止标准，74例合格病例被纳入研究。溶血组中，轻度溶血组纳入病例数为4例，病例数太少，未进行统计学分析。溶血组和非溶血对照组病例在性别构成、胎龄、分娩方式、出生体重、日龄等方面差异无统计学意义，两组患儿具有可比性。2.比较各组间单核细胞表面分子TLR4的表达，中度溶血组和重度溶血组比非溶血对照组表达低（P＜0.01），且重度溶血组比中度溶血组表达低（P＜0.01），轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞 TLR4表达的绝对值接近非溶血对照组均数。3.比较各组间单核细胞NF-κB蛋白的表达，溶血组比非溶血对照组表达低（ P＜0.01），溶血组中重度溶血组比中度溶血组表达低（ P＜0.01），轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞NF-κB蛋白表达的绝对值接近非溶血对照组均数。4.比较各组间单核细胞细胞因子 IL-12的表达，中度溶血组和重度溶血组比非溶血对照组表达低（ P＜0.01），且重度溶血组比中度溶血组表达低（P＜0.01），轻度溶血组纳入的4例所测单核细胞 IL-12表达的绝对值接近非溶血对照组均数。5.TLR4、NF-κB及 IL-12表达水平与胆红素浓度的相关性分析：（1）单核细胞 TLR4蛋白的表达与血浆胆红素浓度呈负相关（r=-0.6426，P＜0.01）。（2）单核细胞 NF-κB蛋白的表达与血浆胆红素浓度呈负相关（r=-0.5366，P＜0.01）。（3）单核细胞细胞因子 IL-12与血浆胆红素浓度呈负相关（r=-0.3859，P＜0.01）。6.TLR4、NF-κB及 IL-12表达水平的相关性分析：（1）单核细胞 TLR4蛋白的表达与单核细胞 NF-κB蛋白的表达呈正相关（r=0.3994，P＜0.01）。（2）单核细胞表面分子 TLR4与单核细胞细胞因子 IL-12两者无相关关系存在（r=0.1916，P＞0.05）。（3）单核细胞 NF-κB蛋白与单核细胞细胞因子 IL-12两者无相关关系存在（r=0.2116，P＞0.05）。7.溶血组丙球治疗前后单核细胞 TLR4、NF-κB及 IL-12表达情况比较：（1）比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 TLR4的表达，丙球治疗后比丙球治疗前表达高（P＜0.01）。（2）比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 NF-κB的表达，丙球治疗后比丙球治疗前表达高（P＜0.01）。（3）比较溶血组丙球治疗前后单核细胞 IL-12的表达，丙球治疗后比丙球治疗前表达高（P＜0.01）。结论：1.新生儿ABO溶血病患儿血中，中、高浓度胆红素可下调单核细胞表面分子TLR4的表达，这种下调作用呈浓度依赖性，血浆胆红素浓度越高，下调作用越强，单核细胞TLR4的表达越低。2.新生儿 ABO溶血病患儿血中，中、高浓度胆红素可下调单核细胞NF-κB蛋白的表达，这种下调作用呈浓度依赖性，胆红素浓度越高，下调作用越强，单核细胞NF-κB蛋白的表达越低。3.新生儿 ABO溶血病患儿血中，中、高浓度胆红素可下调单核细胞细胞因子 IL-12的分泌，这种下调作用呈浓度依赖性，胆红素浓度越高，下调作用越强，单核细胞 IL-12的表达越低。4.丙种球蛋白可恢复新生儿 ABO溶血病血中单核细胞免疫功能。提示胆红素对新生儿免疫细胞的影响可能与调控 TLRs信号通路中 TLR4、NF-κB及 IL-12的表达有关，丙种球蛋白可恢复新生儿受损的免疫细胞功能。

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封面

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验对象及分组

2 主要实验材料和试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5实验流程图

6 实验预期目标

7 伦理问题

8 统计学处理

结果

1 纳入对象及基线资料

2 流式细胞结果的观察

3 TLR4、NF-κB及IL-12表达水平与胆红素浓度的相关性

4 TLR4、NF-κB及IL-12表达水平的相关性

5 溶血组丙球治疗前后单核细胞各检测值表达情况

讨论

1 ABO血型不合溶血病免疫学基础

2选取非溶血对照组和溶血组中未纳入轻度溶血组的原因

3 胆红素对单核细胞表面分子TLR4表达的影响

4胆红素对单核细胞表面分子NF-κB表达的影响

5 胆红素对单核细胞表面分子IL-12表达的影响

6 TLR4、NF-κB及IL-12表达水平的相关性

7丙种球蛋白对单核细胞TLR4、NF-κB及IL-12表达水平的影响

结论

参考文献

英文缩略词对照表

致谢

综述:Toll样受体4在免疫相关细胞中的作用

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