具有免疫原性ASFV膜蛋白的筛选与鉴定

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第一章 绪论

1.1 非洲猪瘟病原学

1.1.1 ASFV基因组与复制

1.1.2 理化性质

1.2 重要ASFV蛋白及功能

1.2.1 具有免疫原性ASFV相关蛋白及功能

1.2.2 重要ASFV膜蛋白及功能

1.3 非洲猪瘟流行病学

1.3.1 流行概况

1.3.2 易感动物与传播途径

1.4 非洲猪瘟检测诊断方法

1.4.1 分子生物学诊断

1.4.2 免疫学检测

1.5 非洲猪瘟疫苗的研究进展

1.6 本研究的目的及意义

第二章 ASFV免疫原性膜蛋白的筛选和鉴定

2.1 材料

2.1.1 ASFV毒株、细胞株和质粒

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.1.4 主要溶液及配方

2.2 方法

2.2.1 质粒转染试验

2.2.2 Western blotting试验方法

2.2.3 激光共聚焦试验

2.2.4 间接免疫荧光试验

2.3 结果与分析

2.3.1 ASFV全基因组的膜蛋白分析

2.3.2 ASFV膜蛋白的表达鉴定

2.3.3 IFA方法鉴定ASFV编码的膜蛋白亚细胞定位

2.3.4 利用WB和IFA方法筛选和鉴定具有免疫原性ASFV编码的膜蛋白

第三章 针对ASFV膜蛋白p17抗体间接ELISA方法的建立

3.1 材料

3.1.1 血清与小肽

3.1.2 主要仪器

3.1.3 主要试剂

3.1.4 主要溶液及配方

3.2 方法

3.2.1 最佳抗原包被浓度与被检血清最佳稀释倍数的确定

3.2.2 最佳封闭液与封闭时间的确定

3.2.3 待检血清工作时间的确定

3.2.4 兔抗猪IgG酶标抗体孵育条件的确定

3.2.5 显色时间的确定

3.2.6 临界值的确定

3.3 结果

3.3.1 最佳抗原包被浓度与被检血清最佳稀释度的确定

3.3.2 最佳封闭液与封闭时间的确定

3.3.3 待检血清工作时间的确定

3.3.4 兔抗猪IgG酶标抗体孵育条件的确定

3.3.5 显色时间的确定

3.3.6 临界值的确定

第四章 抗ASFV膜蛋白pDP148R单克隆抗体的制备

4.1 材料

4.1.1 病毒株、菌株、细胞株、载体

4.1.2 主要试剂

4.1.3 主要仪器

4.2 方法

4.2.1 质粒构建

4.2.2 DP148R重组蛋白的原核表达，鉴定与纯化

4.2.3 免疫BALB/c小鼠

4.2.4 DP148R单克隆抗体的制备

4.3 结果

4.3.1 ASFV HLJ/18毒株编码的pDP148R蛋白是有重要生物学功能的膜蛋白

4.3.2 DP148R重组蛋白的原核表达、鉴定与纯化

4.3.3 杂交瘤细胞筛选及亚克隆

4.3.4 单克隆抗体特异性检测

第五章 讨论

第六章 全文结论

参考文献

致谢

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