抗犬细小病毒基因工程抗体的制备及初步应用

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主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 犬细小病毒研究进展

1.1.1 犬细小病毒简介

1.1.2 CPV的理化特征

1.1.3 CPV基因组结构

1.1.4 CPV的病毒蛋白

1.1.5 VP2蛋白的功能特点

1.1.6 CPV流行特征

1.1.7 发病机理与临床症状

1.1.8 CPV的诊断与防治

1.2 犬细小病毒与猫细小病毒的亲缘关系

1.3 单链抗体

1.3.1 单链抗体的特点

1.3.2 原核系统表达scFv的优势

1.3.3 辅助大肠杆菌表达单链抗体的酶

1.4 研究的目的及意义

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 毒株、细胞株、菌株及质粒

2.1.2 主要试剂

2.1.3 溶液的配制

2.2 scFv的制备方法

2.2.1 抗体可变区基因的获得

2.2.2 scFv的克隆及重组质粒筛选

2.2.3 pOPE-scFv的原核表达及Western blot鉴定

2.2.4 原核表达蛋白的表达形态分析

2.2.5 构建优化质粒pET23b-GB

2.2.6 pET23b-GB的原核表达与表达形态分析

2.2.7 利用ELISA探索最优表达条件

2.3 原核表达scFv的纯化与鉴定

2.3.1 目的蛋白的纯化

2.3.2 scFv的间接免疫荧光（IFA）鉴定

2.3.3 病毒的TCID50测定

2.3.4 scFv的中和活性鉴定

2.4 scFv的初步应用

第三章 结果

3.1 scFv克隆载体的构建

3.2 抗体可变区基因序列分析

3.2.1 重链可变区序列分析

3.2.2 轻链可变区序列分析

3.3 重组质粒pOPE-scFv的原核表达

3.3.1 在不同感受态中的表达及Western blot分析

3.3.2 表达形态分析

3.4 scFv优化表达质粒构建

3.5 优化重组质粒pET23b-GB的原核表达

3.5.1 pET23b-GB与pOPE-scFv的表达对比

3.5.2 pET23b-GB可溶性表达探索

3.6 诱导表达条件的优化

3.7 目的蛋白scFv的纯化

3.8 scFv的间接免疫荧光鉴定

3.9 中和活性测定

3.9.1 CPV和FPV的TCID50测定

3.9.2 中和试验

3.10 人工感染治疗试验

第四章 讨论

4.1 问题分析

4.2 研究价值

第五章 结论

参考文献

致 谢

作者简历