流感病毒多种重要蛋白的单克隆抗体制备及其初步应用

目录

声明

主要符号对照表

第一章 引 言

1.1 流感病毒概述

1.2 流感病毒基因组结构

1.3 流感病毒的vRNP复合体

1.4 抗原表位的鉴定方法

1.4.1 多肽合成技术

1.4.2 氨基酸定点突变技术

1.4.3 肽扫描技术

1.4.4 X射线晶体学与核磁共振技术

1.4.5 噬菌体展示技术

1.5 胶体金免疫层析试纸条

1.6 目的与意义

第二章 抗流感病毒聚合酶蛋白和NP蛋白单克隆抗体的制备

2.1 试验材料

2.1.1载体、菌种、病毒、细胞和试验动物

2.1.2主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.2 试验方法

2.2.1 引物设计

2.2.2 重组质粒的构建和鉴定

2.2.3 重组蛋白PB2-1、PB2-2、PB1-1、PB1-2、PA-1、PA-2和NP-1、NP-2的表达与纯化

2.2.4 抗PB2、PB1、PA和NP单克隆抗体的制备

2.2.5 腹水的制备

2.2.6 单克隆抗体的纯化

2.2.7 单克隆抗体的亚类鉴定

2.2.8单克隆抗体的Western Blot检测

2.2.9 单克隆抗体的广谱性检测

2.3 试验结果

2.3.1 重组蛋白的小量表达

2.3.2 重组蛋白的大量表达

2.3.3 重组蛋白的纯化

2.3.4 检测免疫BALB/c小鼠血清效价

2.3.5 建立iELISA方法的最佳工作浓度

2.3.6 筛选阳性杂交瘤细胞

2.3.7 单克隆抗体的亚型鉴定

2.3.8单克隆抗体的Western Blot检测

2.3.9 单克隆抗体的广谱性检测

2.4 讨论

第三章 流感病毒聚合酶蛋白和NP蛋白抗原表位鉴定

3.1 试验材料

3.1.1 主要细胞、载体、感受态

3.1.2 主要试剂和仪器

3.2 试验方法

3.2.1 引物设计

3.2.2 多肽合成

3.2.3 pCAGGS-GST截短质粒的构建与表达

3.2.4 NP-pMD18T截短质粒的构建与表达

3.2.5 NP-pCAGGS-GST删除质粒的构建

3.2.6 瞬时转染试验

3.2.7 免疫印迹试验检测截短质粒和删除质粒的表达

3.2.8 免疫印迹试验检测单克隆抗体识别的抗原表位

3.3结果

3.3.1免疫印迹试验检测截短质粒和删除质粒的表达

3.3.2免疫印迹试验检测单克隆抗体识别的抗原表位

3.4 讨论

第四章 抗聚合酶蛋白和NP蛋白单克隆抗体的应用性

4.1 试验材料

4.1.1 细胞、病毒

4.1.2 试验试剂和仪器

4.2 方法

4.2.1 病毒感染

4.2.2 激光共聚焦试验

4.2.3 免疫共沉淀试验(CO-IP)

4.3 结果

4.3.1激光共聚焦试验检测单克隆抗体的应用

4.3.2 单克隆抗体应用于免疫共沉淀试验

4.4 讨论

第五章 快速检测流感病毒胶体金试纸条的研制

5.1 试验材料

5.1.1 病毒

5.1.2 主要试剂和仪器

5.1.3 溶液配制

5.2胶体金试纸条的组装

5.2.1 胶体金标记抗体最佳pH值的确定

5.2.2 胶体金标记抗体最佳标记量的确定

5.2.3 胶体金标记抗体的方法

5.2.4 胶体金试纸条检测线和质控线包被抗体浓度的确定

5.2.5 胶体金试纸条最佳硝酸纤维素膜的选择

5.2.6 胶体金试纸条最佳膜烘干时间的选择

5.2.7 胶体金试纸条最佳观察时间的选择

5.2.8 胶体金试纸条的组装过程

5.2.9胶体金试纸条结果的判定

5.2.10 胶体金试纸条的广谱性

5.3 结果

5.3.1 胶体金标记抗体最佳pH值的确定

5.3.2 胶体金标记抗体最佳标记量的确定

5.3.3 胶体金试纸条检测线和质控线包被抗体浓度的确定

5.3.4 胶体金试纸条最佳硝酸纤维素膜的选择

5.3.5 胶体金试纸条最佳膜烘干时间的选择

5.3.6 胶体金试纸条最佳检测时间的选择

5.3.7 胶体金试纸条的广谱性

5.4 讨论

第六章 结论

参考文献

致谢

作者简历