基于单个B细胞抗体技术研制PRRSV特异性单克隆抗体

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主要符号对照表

第一章 绪 论

1.1 猪繁殖与呼吸综合征简介

1.1.1 PRRSV的生物学特征

1.2 PRRSV的遗传变异

1.3 PRRSV的致病机制

1.4 PRRSV的免疫学特性

1.4.1 PRRS产生的体液免疫应答

1.4.2 PRRS产生的细胞免疫应答

1.5 PRRS的预防与控制

1.6 单个B细胞抗体技术简述

1.7 研究目的与意义

第二章 PRRSV抗原纯化与动物免疫试验

2.1 试验材料

2.1.1 试验动物

2.1.2 细胞和毒株

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器

2.2 试验方法

2.2.1 PRRSV全病毒抗原的纯化

2.2.2 生物素标记PRRSV抗原及WB检测

2.2.4 静脉采血

2.2.5 全血RNA的提取

2.2.6 血液病毒血症的测定

2.2.7 病毒血清微量中和试验

2.3 试验结果

2.3.1 蔗糖密度梯度超速离心结果

2.3.2 PRRSV病毒粒子电镜观察结果

2.3.3Western blot检测生物素标记PRRSV抗原结果

2.3.4 血液病毒血症的结果

2.3.5 病毒血清微量中和试验结果

2.4 讨论

第三章 FACS分选PRRSV抗原特异性单个B细胞以及猪源单克隆抗体的表达与鉴定

3.1 试验材料

3.1.1 主要试剂

3.1.2 主要仪器

3.2 试验方法

3.2.1 猪外周血单核细胞的分离

3.2.2 FACS分选单个B细胞

3.2.3 单细胞cDNA分子的制备及PCR扩增

3.2.4 载体构建与抗体质粒制备

3.2.5 小量表达抗体

3.2.6 间接免疫荧光试验（IFA）检测抗体的活性

3.2.7 表达抗体

3.2.8 抗体纯化

3.2.9 纯化后抗体的分析

3.2.10 间接免疫荧光试验(IFA)检测抗体的反应性

3.2.11 病毒中和试验检测抗体的中和活性

3.2.12 抗体识别抗原蛋白的鉴别

3.2.13Western blot验证抗体识别抗原蛋白

3.2.14 分析9株抗体氨基酸序列

3.3 试验结果

3.3.1 PRRSV特异性B细胞FACS分选结果

3.3.2 单个B细胞PCR扩增结果

3.3.3 IFA检测抗体与PRRSV反应性的结果

3.3.4 抗体表达纯化的鉴定结果

3.3.5 抗体反应性检测结果

3.3.6 病毒中和试验结果

3.3.7Western blot鉴别抗体识别抗原蛋白的结果

3.3.8Western blot验证抗体识别抗原蛋白的结果

3.3.9 抗体可变区氨基酸比对分析结果

3.4 讨论

全文总结

参考文献

致谢

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