RNF220表达调控机制的研究

摘要

Sonic Hedgehog(Shh)信号在调控神经管腹侧神经元的分化中起着关键作用。RNF220编码一个泛素连接酶，在中后脑与脊髓的腹侧区域表达，通过调控Shh信号通路转录因子Gli的活性参与腹侧神经管的图式形成。RNF220在腹侧神经管特异表达的转录调控机制，特别是其自身的表达是否受到Shh信号的调控尚不清楚。本论文解析了RNF220基因的潜在增强子元件，并以鸡胚为模型，通过报告基因系统，验证了其中一个超级保守元件M280在神经管中具有转录激活活性，还发现在鸡胚神经管中激活Shh信号活性会激活RNF220的异位表达。作为一个泛素连接酶，RNF220自身的蛋白稳定性是否受到泛素化修饰的影响及其调控机制也是一个重要问题。本文发现，RNF220是泛素连接酶Smurf1/2的靶蛋白，Smurf可结合RNF220并诱导其泛素化与降解。论文还发现锌指蛋白ZC4H2可抑制Smurf对RNF220的泛素化而提高其稳定性。本文初步揭示了RNF220基因的转录水平和蛋白翻译后修饰水平的调控机制。

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摘要

第1章 RNF220转录调控机制的初步研究

1．1 绪论

1．1．1 Shh信号与神经管背腹轴的图式形成

1．1．2 RNF220参与小鼠神经系统的图式形成

1．1．3 脊椎动物基因组内非编码区的超保守元件参与基因转录调控

1．1．4 RNF220基因组内非编码区超保守元件M280

1．1．5 研究思路和意义

1．2 实验材料与方法

1．2．1 实验材料

1．2．2 实验方法

1．3 结果

1．3．1 RNF220基因非编码区进化保守序列分析

1．3．2 RNF220的调控元件M280在神经管中具有活性

1．3．3 激活Shh信号活性使RNF220异位表达

1．4 讨论

第2章 RNF220蛋白稳定性的调节机制

2．1 绪论

2．1．1 E3泛素连接酶RNF220

2．1．2 与RNF220相互作用的小核蛋白ZC4H2

2．1．3 ZC4H2影响BMP信号通路

2．1．4 研究思路和意义

2．2 实验材料与方法

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验方法

2．3 结果

2．3．2 Smurf1／2可以和RNF220相互作用

2．3．3 Smurf1／2使RNF220蛋白稳定性下降

2．3．4 Smurf1／2促进RNF220的K48-linked泛素化修饰

2．3．5 Smurf1／2参与Gsk3 β对RNF220蛋白水平的调控

2．3．6 RNF220先被Gsk3 β进行磷酸化继而被Smurf泛素化

2．4 讨论

参考文献

致谢

硕士在读期间发表的学术论文