维生素C增强加巴喷丁对神经病理性疼痛的镇痛效应及其机制

摘要

研究目的：神经病理性疼痛与活性氧簇（Reactive oxygen species，ROS）有关，而ROS清除剂可以治疗神经病理性疼痛。维生素C（Vitamin C，VitC）是一种重要的自由基清除剂，但VitC对神经病理性疼痛的调节作用尚不明确。加巴喷丁可以有效治疗神经病理疼痛，但加巴喷丁作为抗癫痫药，大剂量使用有较严重的副作用，如头昏、嗜睡等。我们拟观察维生素C是否可以通过清除ROS增强加巴喷丁对坐骨神经慢性压迫损伤（Cbronic constriction injury，CCI）大鼠神经病理性痛的镇痛效应及其可能机制。　　研究方法：SD大鼠随机分为无处理组(Naive)，假手术组(Sham)、坐骨神经慢性压迫损伤组(CCI)、维生素C500mg/kg处理组（VitC）、加巴喷丁10，30，100mg/kg处理组(Gap10、Gap30、Gap100)，和维生素C500mg/kg联合加巴喷丁10，30，100mg/kg处理组（VitC+Gap10、30、100），n=10。CCI模型建立后7天开始腹腔注射给药，每天两次，连续7天。建模前、建模后3、7、14天检测机械缩足阈值(Paw witbdrawal threashold，PWT)和热缩足潜伏期(Paw withdIawal latency，PWL)评估疼痛行为学。建模后第14天收集血、LA-6背根神经节(Dorsal root ganglion，DRG)和脊髓标本，从血液分离血清，脊髓制成组织匀浆，检测血清和脊髓组织匀浆总超氧化物歧化酶(Total superoxide dismutase，T-SOD)活性和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量评价氧化应激水平，RT-PCR和免疫印迹法在基因和蛋白水平检测LA-6 DRG与维生素C转运相关的钠依赖维生素C转运体2(Sodium dependent vitamin C transport，SVC 12)和葡萄糖转运体3（Glucose transporter，GLUT3）蛋白，以及与突触传递相关的Cav3.2 T型钙离子通道(Cav3.2)。此外采用荧光免疫组化定位SVCT2和GLUT3蛋白在DRG表达。　　研究结果：加巴喷丁剂量达到100mg/kg时可以显著缓解CCI引起的机械性缩足反射阈值(PWT)和热缩足反射潜伏期(PWL)降低。联合使用VitC500 mg/kg时，可以把加巴喷丁的最小有效剂量降低到30mg/kg。进一步研究发现VitC单独或联合加巴喷丁可以显著降低CCI引起的血清中氧化应激水平增高，并逆转CCI引起的DRG的SVC 12基因和蛋白表达减少；加巴喷丁可以有效降低CCI引起的DRG中GLUT3基因和蛋白表达增加；而VitC和加巴喷丁都可以逆转CCI引起的Cav3.2基因和蛋白表达上调。免疫组化结果发现SVCT-2和GLUT3蛋白主要表达在DRG神经元而非卫星胶质细胞中。　　研究结论：我们认为VitC与加巴喷丁联合用药可以增强加巴喷丁对神经病理性疼痛的疗效，从而降低加巴喷丁的有效剂量，减少其副作用。维生素C增强加巴喷丁镇痛效应的的可能机制：VitC提高外周DRG神经元的SVCT2水平促进自身跨膜转运，有效降低神经损伤引起的细胞内氧化应激、降低细胞兴奋性从而增强加巴喷丁的镇痛疗效。

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