单链抗体(scFv)与抗肿瘤多肽(ACP)融合蛋白的设计及其抗肿瘤活性研究

目录

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摘要

符号说明

第一章绪论

1．1课题背景

1．2抗肿癯多肽

1．2．1概述

1．2．2结构特点

1．2．3作用方式

1．2．4优点

1．3表皮生长因子简介

1．4单链可变片段简介

1．5包涵体的复性

1．5．1包涵体的概述

1．5．2蛋白质折叠复性及主要影响因素

1．5．3包涵体复性的常用方法

1．6检测抗体药物活性的常用方法

1．6．1抗原结合能力测定

1．6．2生物学活性测定

1．7研究目的与意义

第二章两种蛋白重组质粒的构建及表达

2．1引言

2．2实验材料和实验试剂

2．2．1质粒

2．2．2菌种

2．2．3实验试剂和实验溶液

2．2．4实验仪器

2．3实验方法

2．3．1目的基因的设计

2．3．2引物设计与预处理

2．3．3目的基因的培养和质粒提取

2．3．4目的基因的扩增

2．3．5琼脂糖凝胶电泳

2．3．6胶回收

2．3．7目的基因与质粒载体的双奠切

2．3．8目的基因与质粒载体的连接

2．3．9大肠杆蕾热击转化实验

2．3．10阳性克隆筛选(誓藩PCR)

2．3．11平板筛选

2．3．12扩大培养

2．3．13重组蛋白的诱导表达及表达条件优化

2．3．14重组蛋白的分离

2．3．15重组蛋白的可溶性检测

2．4实验结果与讨论

2．4．1目的基因的设计

2．4．2目的基因的扩增

2．4．3目的基因与质粒载体的双酶切

2．4．4阳性克隆筛选(菌落PCR)

2．4．5重组蛋白的诱导表达及表达条件优化

2．4．6重组蛋白的可溶性检测

2．5小结

第三章重组蛋白的纯化及条件优化

3．2．3 Co-NTA柱纯化带有组氨酸标签的蛋白

3．2．4少量变性样品的脱盐处理

3．2．5蛋白质的复性

3．2．6 AKTA pure蛋白纯化系统纯化

3．2．7 Western blot鉴定

3．3实验结果与讨论

3．3．2 Co-NTA柱纯化带有组氨酸标签的蛋白

3．3．3蛋白质的复性

3．3．4蛋白质纯化条件和复性条件的优化

3．3．5 AKTA pure蛋白纯化系统纯化

3．3．6 Western blot鉴定

3．4小结

第四章两种蛋白的活性检测

4．2．1细胞的复苏、培养与冻存

4．2．2细胞ELISA检测

4．2．3细胞生长抑制实验

4．3实验结果与讨论

4．3．1细胞ELISA检测

4．3．2细胞毒性实验

4．4小结

第五章结论与展望

5．1结论

5．2展望

参考文献

附录

致谢

作者和导师简介