肿瘤相关的细胞外泌体的提取表征及其基于适配体的应用方法研究

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摘要

第一章绪论

1．1．1外泌体的组成成分

1．1．2外泌体的分离方法

1．1．3外泌体的医学应用

1．1．4外泌体的检测方法

1．2核酸适配体概述

1．2．1适配体简介

1．2．2适配体的优势

1．2．3适配体的应用

1．3 SELEX技术

1．3．1 SELEX技术的原理

1．3．2 SELEX技术的基本流程

1．3．3 SELEX技术的分类

1．4本课题的目的和意义

第二章外泌体的提取及表征

2．1引言

2．2实验材料与实验仪器

2．2．1实验材料

2．2．2实验仪器

2．3 HUVEC的培养

2．3．1培养前的准备工作

2．3．2复苏、传代、冻存

2．4 A549细胞的培养

2．4．1细胞复苏

2．4．2细胞传代

2．5外泌体的提取及表征

2．5．1外泌体的提取

2．5．2外泌体的表征

2．6实验结果

2．6．1 HUVEC外泌体的表征结果

2．6．2 A549外泌体的表征结果

2．7小结

第三章外泌体靶标的制备及表征

3．1引言

3．2实验材料与实验仪器

3．2．1实验材料

3．2．2实验仪器

3．3外泌体与乳胶珠偶联

3．4偶联结果表征

3．4．1 BCA试剂盒测蛋白法

3．4．2流式细胞仪测荧光法

3．5实验结果

3．5．1偶联前后蛋白浓度的比较

3．5．2儡联后荧光强度的比较

3．6小结

第四章HUVEC外泌体适配体的筛选

4．1引言

4．2实验材料与实验仪器

4．2．1实验材料

4．2．2实验仪器

4．3 PCR条件的优化

4．3．1退火温度的优化

4．3．2扩增轮数的优化

4．4 HUVEC适配体的筛选

4．4．1筛选过程

4．4．2次级文库的制备

4．5实验结果

4．5．1 PCR条件的优化结果

4．5．2文库吸光度检测

4．6小结

第五章外泌体的试纸条开发

5．1引言

5．2实验材料与实验仪器

5．2．1实验材料

5．2．2实验仪器

5．3试纸条的制备及其条件的优化

5．3．1胶体金的制备及表征

5．3．2胶体金与适配体的偶联

5．3．3试纸条条件的优化

5．3．4试纸条的特异性检测

5．4实验结果

5．4．1胶体金的表征结果

5．4．2试纸条条件优化结果

5．4．3试纸条对外泌体的检测结果

5．5小结

6．1总结

6．2展望

参考文献

致谢

作者攻读学位期间发表的学术论文及科研成果

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