大肠杆菌生物合成3--苯丙醇

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摘要

第一章绪论

1．1合成生物学及代谢工程进展

1．2天然产物的生物合成

1．3莽草酸途径

1．4 3-苯丙醇的应用以及生产现状

1．4．3 3-苯丙醇的生产现状

1．5辅因子再生系统

1．6本论文的立题依据和意义

1．7本论文的研究内容

第二章常规实验方法

2．1仪器

2．2试剂

2．3培养基

2．4基因组的提取

2．5质粒提取

2．6 PCR反应

2．7胶回收

2．8酶切

2．9连接

2．10化学转化

2．11电转化

2．12 RED重组进行基因敲除

2．13 OD600测定菌体浓度

2．14 HPLC测定方法

第三章设计并筛选转化肉桂酸生产3-苯丙醇的最佳途径

3．1引言

3．2实验材料

3．2．1载体和菌株

3．2．2培养基

3．3实验方法

3．3．1引物设计

3．3．2质粒构建

3．3．3添加实验

3．4实验结果与分析

3．4．1质粒构建及验证

3．4．2验证途径1的可行性以及对肉桂酸的转化效率

3．4．3验证途径2的可行性以及对肉桂酸的转化效率

3．4．4微好氧条件下途径2的可行性以及对肉桂酸的转化效率

3．4．5组装完整的3-苯丙醇从头合成途径

3．5本章小结

第四章构建肉桂酸高产菌株

4．1引言

4．2实验材料

4．2．1载体和菌株

4．2．2培养基

4．3实验方法

4．3．1引物设计

4．3．2质粒构建

4．3．3添加实验

4．3．4从头合成肉桂酸

4．4实验结果与分析

4．4．1从头合成肉桂酸

4．4．2优化TAL启动子强度

4．4．3增强莽草酸途径碳通量

4．4．4敲除竞争途径

4．5本章小结

第五章从头合成3-苯丙醇及途径优化

5．1引言

5．2实验材料

5．2．1载体和菌株

5．2．2培养基

5．3．3从头合成3-苯丙醇

5．4．2模块优化

5．4．3增加体系还原力

5．5本章小结

第六章结论与展望

6．1结论

6．2展望

参考文献

附录

致谢

作者及导师介绍