蒽环类抗癌药阿霉素、阿克拉霉素相关合成酶基因异源表达与生物合成研究

目录

声明

摘要

第一章绪论

1．1引言

1．2癌症治疗现状与抗癌药应用前景

1．2．1癌症治疗现状

1．2．2抗癌药物现状与前景

1．2．3从天然产物中发掘新药

1．3阿霉素、阿克拉霉素概述

1．3．1阿霉素简介

1．3．2阿克拉霉素简介

1．4蒽环类抗癌药

1．4．1蒽环类抗癌药简介

1．4．2葸环类抗癌药药理活性

1．5阿霉素、阿克拉霉素的合成方式

1．5．1阿霉素半化学合成

1．5．2阿霉素天然生物发酵合成

1．5．3阿克拉霉素A天然生物发酵合成

1．5．4 Ⅱ型聚酮化合物的合成

1．6高价值产物合成新策略

1．6．1微生物工厂实现多基因异源表达

1．6．2模块化共培养

1．7课题研究目的与意义

第二章阿霉素、阿克拉霉素A单个关键基因异源表达研究

2．1引言

2．2实验思路

2．3实验材料

2．3．1菌种与质粒

2．3．2试剂与耗材

2．3．3仪器与设备

2．3．4培养基与培养条件

2．4实验思路

2．4．2外源基因克隆技术路线

2．5实验方法

2．5．1目的基因获取

2．5．2目的基因的扩’增与纯化

2．5．3质粒提取

2．5．4琼脂糖凝胶电泳与切胶回收

2．5．5．酶切与切胶回收

2．5．6．连接与热转化

2．5．7．PCR与菌落PCR

2．5．8．重组大肠杆菌的摇瓶发酵培养

2．5．9．SDS-PAGE蛋白电泳

2．5．10．菌种保藏

2．6结果讨论

2．6．1异源表达载体构建

2．6．2蛋白电泳分析目的基因异源表达情况

2．7本章所用引物序列

2．8本章小结

第三章阿霉素、阿克拉霉素A单个关键基因信息学分析

3．1引言

3．2本章所用分析工具

3．3结果讨论

3．3．1．氨基酸序列理化性质分析

3．3．2．蛋白质二级结构预测

3．3．3．蛋白质三级结构预测

3．4．本章小节

第四章阿霉素、阿克拉霉素A模块内多基因串联表达研究

4．1．引言

4．2．实验材料

4．2．1菌种与质粒

4．2．2试剂与耗材

4．2．3仪器与设备

4．2．4培养基与培养条件

4．3．实验思路

4．3．1多基因串联载体构建的探究

4．3．2多基因串联顾序的确定

4．4．实验方法

4．4．1高浓度质粒提取

4．4．2酶切与纯化

4．4．3多基因串联载体的连接与热转化

4．4．4电转化

4．4．5多基因串联发酵条件优化

4．5．结果与讨论

4．5．1聚酮合模块PCR验证结果

4．5．2聚酮合模块蛋白电泳验证结果

4．5．3聚酮合模块表达结果

4．5．4阿克拉霉素A生成模块表达结果

4．5．5培养基优化

4．6．本章小节

第五章总结与展望

5．1．工作总结

5．2．课题反思与展望

参考文献

附录一

附录二

附录三

致谢

导师信息与作者