小分子递质和维甲酸对SK-N-SH细胞增殖和分化作用研究

摘要

本文旨在研究乙酰胆碱(acetylcholine，Ach)在SK-N-SH细胞生长增殖方面的作用；探讨维甲酸(retinoicacid，RA)对SK-N-SH细胞诱导分化的影响，用CCK-8比色法和流式细胞术，检测Ach及拮抗剂阿托品(atropine，Atro)和RA对SK-N-SH细胞增殖活性和周期分布的调节作用；荧光定量PCR、免疫印迹和流式细胞间接免疫荧光技术，分析Ach及拮抗剂Atro和RA作用SK-N-SH细胞后毒蕈碱受体亚型Ⅰ型(muscarinicacetylcholinereceptors1，mAchR1)和c-fos的表达差异运用倒置显微镜、荧光免疫显微镜观察以及免疫印迹法，检测RA作用SK-N-SH细胞前后细胞的形态学变化、神经元烯醇化酶(neuron-specificenolase，NSE)分布和神经丝蛋白(neurofilamentprotein，NF)亚基的变化。

目录

前言

材料和方法

1 SK-N-SH细胞培养

2 细胞增殖和毒性分析

3 mAchR1 cDNA第一链合成

4 实时荧光定量PCR方法建立

5 SK-N-SH mAchR1 mRNA相对定量

6 Western Blot

7 免疫荧光

8 流式细胞术

9 统计学处理

结果

1 SK-N-SH细胞形态学观察

2 SK-N-SH细胞增殖和毒性分析

3 重级质粒的鉴定

4 荧光PCR条件

5 mAchR1、β-actin和c-fos cDNA标准曲线的建立

6 C-fos熔解曲线分析与电泳

7 优化后确定的体系与反应条件

8 用药前后mAchR1和c-fos变化的倍数

9 Western Blot

10 免疫荧光染色

11 细胞周期测定

12 mAchR1蛋白变化

分析与讨论

小结

参考文献

致谢

综述 毒蕈碱受体研究方法进展

参考文献