温郁金茎叶和黑紫橐吾抗肿瘤活性研究

摘要

目的：研究温郁金地上茎叶和黑紫橐吾根及根茎抗肿瘤活性,探索其作为温郁金根块替代药材以及天然抗肿瘤药物的可行性. 方法：1.将干燥温郁金茎叶粉碎,90﹪乙醇浸提,提取液合并减压蒸发,浓缩回收得到乙醇总浸膏,在乙醇浸膏中加入适量的蒸馏水,然后用石油醚萃取3次,将石油醚部位合并浓缩回收,得到石油醚浸膏;接着用氯仿萃取3次,萃取液浓缩回收得到氯仿浸膏;母液继续用乙酸乙酯萃取3次并浓缩回收得到乙酸乙酯浸膏.最后萃取得到正丁醇浸膏,剩余水层回收浓缩得到水层浸膏.体外培养喉癌细胞(Hep-2),用DMSO分别溶解上述乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水层浸膏并配制浓度为20、40、80、160、320μg/ml,以5-fu为阳性对照,采用四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT法)测定各实验组对Hep-2细胞的抑制作用,SPSS软件分析各实验组数据有无统计学意义.2.将干燥黑紫橐吾根及根茎粉碎,称取5.0kg,95﹪乙醇浸提,提取液合并减压蒸发,浓缩回收乙醇总提取物.在乙醇浸膏中加入适量的蒸馏水,然后用石油醚萃取3次,将石油醚部位合并浓缩回收,得到石油醚浸膏;接着用乙酸乙酯萃取3次,萃取液浓缩回收得到乙酸乙酯浸膏;母液继续用正丁醇萃取3次并浓缩回收得到正丁醇浸膏,剩余水层回收浓缩得到水层浸膏.将所得乙酸乙酯浸膏充分干燥至恒重,用氯仿-甲醇(50:0-0:1)以梯度反复进行硅胶柱层析,TLC检测合并相同组分,将含有目标化合物的浸膏经硅胶H梯度洗脱,再经Sephadex LH-20柱层析纯化(甲醇洗脱),得到艾里莫芬双内酯化合物,并用DMSO溶解,配制浓度为100、,33.3、11.1、3.7 μg/ml,以顺铂为阳性对照,采用MTT、法测定各实验组对KB(口腔上皮癌)细胞和BEL-7404(人肝癌)细胞的抑制作用. 结果：1.温郁金茎叶总提取物、石油醚提取物和5-fu阳性对照组明显抑制Hep-2细胞的生长,其抑制肿瘤细胞活性在测定浓度范围内呈现良好的剂量依赖性,氯仿、正丁醇和水层提取物对Hep-2细胞具有较弱的抑制作用,在测定浓度范围内也具有剂量依赖性;由抑制率-浓度图可知,在相同浓度下,各实验组抗肿瘤活性大致具有如下趋势:总提取物>5-fu阳性对照>石油醚部位>氯仿部位>正丁醇部位>乙酸乙酯部位、水层部位,其中,总提取物、5-fu阳性对照和石油醚部位曲线在低浓度区有交叉,5-fu阳性对照和石油醚部位曲线在高浓度区有交叉,氯仿、正丁醇和水层部位曲线在低浓度区有交叉,正丁醇、乙酸乙酯和水层部位曲线在高浓度区有交叉. 2.黑紫橐吾中的艾里莫芬双内酯化合物对KB细胞的半数抑制浓度IC<,50>值(抑制率为50﹪时相应的浓度)为7.65×10<'-5>M,阳性对照顺铂的lC<,50>值为5.67×10<'-6>M,艾里莫芬双内酯化合物对BEL-7404细胞的半数抑制浓度IC<,50>值为1.44×10<'-4>M,阳性对照顺铂的IC<,50>值为1.50×10<'-5>M. 结论：1.温郁金茎叶总提取物具有抗肿瘤活性,且活性高于作为阳性对照的5-fu:其石油醚部位含有较多组分,该部位也是抗肿瘤的主要活性部位:氯仿、正丁醇和水层提取物具有较弱抗肿瘤活性;石油醚、氯仿、正丁醇部位和水层提取物均具有抗肿瘤活性,可见其抑癌作用由多种成分多种机制介导,是

目录

引言

一、温郁金茎叶抗肿瘤活性研究

材料与方法

结果

分析与讨论

小结

二、黑紫橐吾中艾里莫芬双内酯抗肿瘤活性研究

材料与方法

结果

分析与讨论

小结

参考文献

附录

致谢

综述 郁金等姜黄属中药药理活性研究现况

学位论文独创性声明及关于学位论文使用授权声明