高浓度胰岛素对急性冠脉综合征患者树突状细胞分化、成熟及免疫功能的影响

摘要

目的:
　　 观察高浓度胰岛素对正常人和急性冠脉综合症患者树突状细胞分化、成熟及免疫功能的影响,探讨高浓度胰岛素对人单核细胞源的树突状细胞、分化、成熟及其免疫功能的影响,进一步探索高浓度胰岛素在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用及其(对)在急性冠脉综合症发生发展中的作用。
　　 方法:
　　 1.采用连续贴壁法分离正常人外周血单核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,50ng/ml)和白细胞介素(IL-4,50ng/ml)的完全培养基中培养。培养5天后收集细胞,作为未成熟DC(imDC),重新铺板后继续在胰岛素浓度分别为Onmol/1、10nmol/1的胰岛素、100nmol/1的胰岛素的完全培养基中培养48小时后,分别收集细胞和上清液,此时细胞作为成熟Dc(mDC),采用流式细胞术检测mDC表面CD80、CD83、CD40的表达;用ELISA法检测上清液中细胞因子工IL-12、IL-10、TNF-α的浓度;用倒置显微镜动念观察DC形态变化。
　　 2.采用连续贴壁法分离急性冠脉综合症患者外周血单核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,50ng/ml)和重组人白细胞介素(IL-4,50ng/ml)的完全培养基中培养。培养5天后收集细胞,作为未成熟DC(imDC),重新铺板后继续在胰岛素浓度分别为Onmol/l、100nmol/1的胰岛素的完全培养基中培养48小时后,收集细胞和上清液,此时细胞作为成熟DC(mDC),采用流式细胞术检测mDC表面CD80、CD83、CD40的表达;用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-12、IL-10、TNF-α的浓度:用倒置显微镜动态观察DC形态变化。
　　 结果:
　　 1.健康对照组:胰岛素浓度分别为10nmol/1和lOOnmol/ml组的DC表面标志CD80(59.65％、84.29％)、CD83(72.51％、90.73％)、和CD40(63.87％、92.38％)的阳性表达率较不含胰岛素的阴性对照组的CDSO(42.57％)、CD83(58.03％)、和CD40(55.02％)阳性表达率升高,并随着胰岛素浓度的升高而升高;培养上清液中细胞因子IL-12(25.62±7.92pg/ml、41.52±11.34 pg/ml)、TNF-α(28.44±8.56 pg/ml、41.56±10.34 pg/ml)的浓度也较阴性对照组的IL-12(10.23±5.26 pg/ml)、TNF-α(15.46±7.35 pg/ml)升高;而细胞因子IL-10的浓度(9.89±7.23 pg/ml、7.36±5.78 pg/ml)则较阴性对照组(12.85±3.62 pg/m;)降低。
　　 2.急性冠脉综合症组:胰岛素浓度为lOOnmol/ml组的DC表面标志CDSO、CD83和CD40阳性表达率(88.18％、89.92％、93.74％)较不含胰岛素的阴性对照组(67.83％、71.08％、71.03％)升高,培养上清液中细胞因子IL-12、TNF-α的浓度(42.24±10.36 pg/ml、40.56±8.96 pg/ml)也较对照组(16.59±7.86pg/ml、18.92±7.84 pg/ml)升高,而细胞因子IL-10的浓度(7.89±6.78 pg/ml)则较对照组(10.93±5.34 pg/ml)降低了。
　　 结论:
　　 1.高浓度胰岛素促进了正常人和急性冠脉综合症患者的DC表面标志物CD40、CD80和CD83的表达;促进了DC对细胞因子IL-12和TNF-α的分泌;对IL-10的分泌则起抑制作用。2.胰岛素对DC表面标志物CD40、CD80和CD83的表达、细胞因子IL-12和TNF-α的分泌的促进作用随着胰岛素浓度的升高而升高;而DC分泌的IL-10则随着胰岛素浓度的升高而下降。
　　 3.高浓度胰岛素通过促进树突状细胞免疫功能成熟,参与动脉粥样硬化免疫炎症反应的发生、发展,是急性冠脉综合症发生的可能机制之一。