室间隔缺损相关基因Pax-8及其下游基因Bcl2l14的实验研究

摘要

目的：用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8(paired boxgene8)的表达,观察其对心肌细胞凋亡和增殖的影响。并运用基因技术寻找Pax-8基因的下游基因。
　　 方法：大鼠胚胎心肌细胞株(H9C2(2-1))转染针对Pax-8基因的小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)后,检测其对细胞凋亡的影响。并分别提取Pax-8基因敲除小鼠纯合子(Pax-8 KO-/-)和杂合子(Pax-8 KO+/-)的心脏总RNA,利用基因芯片、半定量RT-PCR和荧光实时定量PCR检测两组小鼠基因表达水平,筛选出转录因子Pax-8的下游基因。
　　 结果：针对Pax-8基因的小干扰RNA片段能有效下调H9C2大鼠胚胎心肌细胞Pax-8 mRNA(50.38％,P<0.05)和蛋白(54.17％,P<0.05)表达,转染后的细胞凋亡和增殖抑制率明显增加。基因芯片检测发现,Pax-8 KO-/-组与Pax-8 KO+/-相比有42个差异表达的基因。半定量RT-PCR验证Bcl2-like14(Bcl2114)基因在Pax-8 KO-/-组上调。定量RT-PCR证实Pax-8 KO-/-组@Bcl2114基因的表达水平较Pax-8 KO+/-组及Pax-8+/+(野生型)组分别上调2.07倍和2.23倍(P<0.01)。
　　 结论： Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。Bcl2114基因为转录因子Pax-8的下游基因,可能在先天性心脏病室间隔缺损的发病机制中发挥重要作用。