不同种类雌激素对缺血性卒中的作用与CREB的相关性

摘要

目的：雌激素对卒中的保护作用已越来越受到人们的关注，许多研究结果显示雌激素对缺血性卒中具有保护作用。为了探讨雌激素对缺血性卒中大鼠的保护作用及其作用机制。在局灶性脑缺血大鼠模型基础上，选用不同种类的雌激素予以预处理，观察实验大鼠海马和室管膜下区(subventricularzone，SVZ)CREB(cAMPresponseelementbindingprotein，环磷酸腺苷应答元件结合蛋白)pCREB（phosphorylatedcAMPresponseelementbindingprotein，磷酸化的环磷酸腺苷应答元件结合蛋白）的变化，以期为雌激素应用于缺血性卒中的治疗提供更多的理论依据。
　　 方法：选用28只SD雌性大鼠(230-250g)，随机分为7组，模型组：17α雌二醇组、雌酮组、17β雌二醇组、雌三醇组；对照组：芝麻油组、生理盐水组、假手术组。各组大鼠建立对应模型。除假手术组外，所有大鼠行双侧卵巢切除术后常规饲养8天后分别连续皮下注射17α雌二醇、雌酮、1713雌二醇、雌三醇、芝麻油、生理盐水，14天后采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型；假手术组常规饲养22天制备大鼠模型。各组大鼠线栓术/假线栓术24小时后进行行为学测试（平衡木行走试验）评价实验大鼠的神经功能缺损情况，然后分批将大鼠断头处死，取脑，分离大鼠的海马和SVZ区组织，应用westernblot方法检测CREB和pCREB，观察各组之间pCREB/CREB灰度值的差异。
　　 结果：
　　 1．行为学的测定
　　 平衡木行走试验与生理盐水组、芝麻油组分别比较，17α雌二醇组、17β雌二醇组和雌三醇组三组大鼠平衡木行走试验时间明显缩短，存在统计学差异(P＜0.05)，表明17α雌二醇组、17β雌二醇组和雌三醇组各组大鼠的行为能力较生理盐水组、芝麻油组要好，运动功能损伤较生理盐水组、芝麻油组轻；而17α雌二醇组、17β雌二醇组和雌三醇组与假手术组相比行走试验时间较长，说明17α雌二醇组、17β雌二醇组和雌三醇组三组大鼠运动损伤较假手术组重。进一步说明17α雌二醇、17β雌二醇和雌三醇可以减轻由于大鼠局灶性脑缺血而造成的神经功能障碍，但不能完全改善大鼠局灶性脑缺血造成的神经功能障碍。17α雌二醇组、17β雌二醇组和雌三醇组三组间大鼠平衡木行走试验时间比较无统计学差异(P＞0.05)，表明17α雌二醇、17β雌二醇和雌三醇对大鼠脑缺血保护作用无差别。而雌酮组和生理盐水组、芝麻油组比较都无统计学差异(P＞0.05)，与假手术组相比行走试验时间较长，说明雌酮组和生理盐水组、芝麻油组组神经功能障碍无差异，雌酮不能减轻由于大鼠局灶性脑缺血而造成的神经功能障碍。
　　 2．Westernblot检测
　　 2.1大鼠海马的westernblot检测大鼠海马的CREB和pCREB在各组中均有表达。与17α雌二醇组、雌酮组、雌三醇组及对照组（生理盐水组、芝麻油组、假手术组）比较，17β雌二醇组标准化后pCREB和CREB的灰度值之比明显上调，差异有统计学差异(P＜0.05)。17α雌二醇组、雌酮组、雌三醇组分别与对照组（生理盐水组、芝麻油组、假手术组）比较无统计学差异(P＞0.05)。
　　 2.2SVZ区的westernblot检测大鼠SVZ区的CREB和pCREB在各组中均有表达。与17α雌二醇组、雌酮组、雌三醇组及对照组（生理盐水组、芝麻油组、假手术组）比较，17β雌二醇组标准化后pCREB和CREB的灰度值之比明显上调，差异有统计学差异(P＜0.05)。17α雌二醇组、雌酮组、雌三醇组分别与对照组（生理盐水组、芝麻油组、假手术组）比较无统计学差异(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1.17α雌二醇、17β雌二醇和雌三醇能改善缺血性卒中模型大鼠的神经功能缺损。
　　 2.17β雌二醇能使海马、SVZ区pCREB/CREB表达增加，提示17β雌二醇增强CREB的磷酸化，是其对缺血性脑卒中的保护作用可能的机制之一。