脂氧素A4对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞通透性的影响

摘要

【目的】
　　 研究脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞单层通透性的影响，并进一步探讨其内在机制。
　　 【方法】
　　 取健康产妇行剖宫产术分娩的新生儿脐带，分离原代脐静脉内皮细胞后进行传代培养并分组：(1)对照组，不加任何处理因素。(2)脂多糖组(单独加入10μg/ml脂多糖并作用24h)。(3)脂氧素A4+脂多糖组(加入100nmol/L脂氧素A4和10yg/ml脂多糖共同培养24h)。采用双室式单层细胞模型系统检测异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白通过内皮细胞的通透系数来计算各组单层内皮细胞通透系数(Pa)；逆转录(RT)PCR检测内皮细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及瞬间受体电位通道1(Transientreceptorpotentialchannel1，TRPC1)的mRNA表达水平；免疫印迹(westernblot)法检测内皮细胞中核因子κB蛋白表达水平；ELISA法检测内皮细胞培养液中TNF-α水平。
　　 【结果】
　　 1、与空白组相比，脂多糖组细胞形态变圆且小，细胞与细胞之间缝隙变大，脂多糖+脂氧素A4组接近正常对照组。
　　 2、以对照组为100％，脂多糖组内皮细胞单层通透系数为(183.1±1.7)％，脂多糖+脂氧素A组为(103.1±2.2)％，脂多糖+脂氧素A4组通透系数较脂多糖组减小了(80.0±2.2)％，两组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3、脂氧素A4抑制脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞核因子κ蛋白及TNF-αmRNA表达水平，对照组为0.24±0.06及0.25±0.05、脂多糖组为0.53±0.06及0.81±0.09、脂多糖+脂氧素A4组为0.19±0.05及0.41±0.07，脂多糖组核因子κB蛋白及TNF-αmRNA表达水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)；脂多糖+脂氧素A组核因子κB蛋白及TNF-αmRNA表达水平明显低于脂多糖组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 4、脂多糖组脐静脉内皮细胞培养液中的TNF-α水平[(31.94±0.01)pg/ml]明显高于对照组[(18.17±0.03)pg/ml)，两组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；脂多糖+脂氧素A4组[(15.72±0.07)pg/ml]明显低于脂多糖组，两组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 5、脂多糖组TRPC1mRNA的表达水平显著高于对照组(P＜0.01)，脂多糖+脂氧素A4组TRPC1mRNA表达水平明显低于脂多糖组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 【结论】
　　 脂氧素A4可以抑制脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞单层通透性增高，其作用可能是通过抑制核因子κB的表达而实现的。