质粒介导喹诺酮耐药基因在大肠杆菌中的研究

摘要

目的 1.了解温州医学院附属第一医院2009年至2011年大肠埃希菌的分布及耐药变迁情况，为临床合理使用抗菌药提供理论依据。 2.了解质粒介导喹喏酮耐药(PMQR)基因的分布情况，对PMQR基因的周围结构及水解底物的特性进行探讨，并对检出PMQR基因的耐药质粒进行质粒分型。 3.对检出率较高的年份菌株进行流行病学的调查研究。 方法 1.回顾性调查2009年至2011年年连续分离的大肠埃希菌的分布情况及感染特性，统计分析大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药谱。 2.PCR检测PMQR(qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib及qepA)基因并测序，对PMQR阳性的细菌进行接合转移试验以确证质粒的可转移性，检测接合子的最低抑菌浓度(MIC)，并研究接合子中PMQR基因的周围结构及质粒分型。 3.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析部分细菌的同源性对PMQR基因检出率较高的细菌进行流行病学的调查。 结果 1.2009年至2011年分离的472株大肠埃希菌中，49％的菌株来自尿液标本，其次为血液、痰液、脓液等。大肠埃希菌对氨苄两林的敏感率最低，其次为头孢唑啉，之后依次是头孢匹美，头孢他啶，左氧氟沙星，庆大霉素，阿米卡星，哌拉两林和亚胺培南，亚胺培南的敏感率最高，达100％。 2.472株大肠埃希菌中，检得qnr基因阳性株36株，其中qnrA6株，经测序菌为qnrA1型，qnrS16株，均为qnrS1型，qnrB14株，包括2株qnrB2，4株qnrB4和8株qnrB6；142株aac(6’)-Ib阳性株测序成功120株，其中经典型66株，cr亚型46株，其他突变8株。 3.含qnrS基因的接合子对喹喏酮类药物的水解能力略高于qnrB基因，各喹喏酮类药物之间耐药性则无明显差异，aac(6’)-Ib-cr只对环丙沙星和诺氟沙星有作用，对左氧氟沙星则无影响。PMQR基因可降低喹喏酮类药物的敏感性，但均达不到临床耐药水平。 4.75株接合子中扩增出整合酶60株，常见ESBLs基因(TEM、SHV、CTX-M-1和CTX-M-9)阳性57株。这些接合子中的质粒主要属于IncF、IncL/M、IncI和IncHI1家族。 5.对2009年56株aac(6’)-Ib阳性的大肠埃希菌进行同源性分析，有两株为同一型，其亲缘关系相近，另有两组亲缘关系可能相近的菌株(每组各3株)。 结论 1.临床分离大肠埃希菌主要引起泌尿道感染，其次是血液感染，对氨苄两林的敏感性最低，对亚胺培南的敏感性最高。 2.472株大肠埃希菌的PMQR基因中aac(6’)-Ib的检出较qnr基因略高，qnrS基因对环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的水解力略高于qnrB基因，各喹喏酮类药物之间的耐药性则无明显差异，而aac(6’)-Ib-cr只能使环丙沙星和诺氟沙星的敏感性降低。 3.PMQR基因常与ESBLs基因一起位于整合子中，且多位于IncF、IncL/M、IncI和IncHI1型质粒中。 4.脉冲场凝胶电泳结果显示，本院2009年大肠埃希菌主要呈散发流行趋势，也存在小范围的克隆播散，应引起临床注意，防止医院患者之间的交叉感染。