声明
摘要
第一章 绪论
1．1神经元极性的建立与维持
1．2轴突起始段(axon initial segment，MS)
1．2．1轴突起始段的结构组成
1．2．2轴突起始段的功能
1．2．3轴突起始段蛋白异常与多种神经疾病相关
1．3 Ankyrin家族蛋白的结构特征及其功能
1．3．1 Ankyrin家族蛋白的结构域组成
1．3．2 Ankyrin家族蛋白的功能
1．3．3神经细胞中的Ankyrin家族蛋白
1．4 Ndel／Ndel1基因的发现及其结构特征
1．5 Ndel／Ndel1基因的功能及其功能缺失相关的疾病
1．6研究Ankyrin-G／Ndel1复合物结构与功能的意义
1．7 GABAA受体的组成与功能
1．8神经细胞轴突起始段处的GABAA受体
1．9 Ankyrin-G对调节GABAA受体的细胞膜稳定至关重要
1．10 Ankyrin-G对GABARAP／GABAA受体复合物功能调节研究的目的与意义
第二章实验材料与方法
2．1实验材料
2．1．1细胞、细菌种类及来源
2．1．3分子克隆相关试剂
2．1．4蛋白纯化柱
2．1．5晶体筛选试剂盒
2．1．6抗体
2．2实验仪器
2．3实验方法
2．3．1分子克隆
2．3．2目的蛋白的表达纯化
2．3．3蛋白相互作用的生化验证-ITC
2．3．4蛋白相互作用的生化验证-FPLC
2．3．6蛋白相互作用的生化验证-GST pull-down
2．3．7圆二色谱
2．3．8蛋白晶体的初筛
2．3．9蛋白晶体的优化
2．3．10晶体数据的收集与处理
2．3．11晶体结构解析和优化
2．3．12定点突变
2．3．13小鼠海马神经细胞的原代培养
2．3．14小鼠海马神经细胞磷酸钙转染
2．3．15 shRNA敲低
2．3．16小鼠海马神经细胞的固定染色
2．3．17荧光显微镜成像和统计学分析
第三章AnkG／Ndel1复合物组装的分子机制及其在神经极性维持中的功能
3．1引言
3．2 AnkG与Ndel／Ndel1相互作用的生化分析
3．2．3 AnkG-NIR同样能结合Ndel1并且结合分子比同样为1∶2
3．2．4 AnkB结合Ndel／Ndel1并且结合分子比同样为1∶2
3．3 AnkB-NIR／Ndel1 CT-CC复合物的晶体结构
3．3．1 AnkB-NIR／Ndel 1 CT-CC复合物晶体的筛选、衍射数据的收集处理和结构解析
3．3．2 AnkB-NIR／Ndel1 CT-CC复合物晶体结构分析
3．3．3 AnkB NIR／Ndel1-CT-CC复合物相互作用界面分析
3．3．4 Ndel1 CT-CC的结合能诱导AnkB-NIR二级结构的转变
3．4 AnkG／Ndel 1和AnkG／Nde 1复合物在轴突起始段(AIS)调控物质选择性进入轴突
3．4．1 Ndel／Ndel1特异性聚集在海马神经元的轴突起始段(AIS)
3．4．2 Ndel／Ndel1在轴突起始段的特异性聚集依赖其与AnkG的相互作用
3．4．3 AnkG／Ndel和AnkG／Ndel1复合物在轴突起始段处调控物质选择性进入轴突
3．5讨论
第四章 GABARAP／GABAA受体复合物的结构解析及AnkG／GABARAP／GABAA受体在神经信号传递中的功能机制
4．1引言
4．2 GABAA受体γ2亚基与GABARAP相互作用的生化分析
4．2．2 GABAA受体γ2亚基特异性结合GABARAP和GABARAPL1而不结合At98家族中其他成员蛋白
4．3 GABARAPL1／γ2 398-415复合物的晶体结构
4．3．1 GABARAPL1／γ2 398-415复合物晶体的筛选、衍射数据的收集处理和结构解析
4．3．2 GABARAPL1／γ2 398-415复合物晶体结构分析
4．3．3 GABARAPL1／γ2 398-415复合物相互作用界面分析
4．3．4 GABAA受体γ2 398-415结合AP2的能力要强于其结合GABARAP
4．3．5 GABAA受体γ2 398-415上酪氨酸磷酸化调节其与GABARAP和AP2的结合
4．4 GABARAP促进GABAA受体向细胞膜上转运(此部分与中科大熊伟教授实验室合作完成)
4．4．1 GABARAP能增加细胞膜上GABAA受体的水平
4．4．2 GABARAP与GABAA受体的相互作用对GABA能神经元信号的传递至关重要
4．5讨论
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文与参加的学术会议
中国科学技术大学;
