琼脂糖凝胶上DNA检测方法及相关检测机制的研究

摘要

目的： 1.研究开发亲环境、灵敏、快速的DNA检测方法，为琼脂糖凝胶上小分子DNA的检测提供合适的方法； 2.探究琼脂糖凝胶上小分子DNA的检测机理，阐明EY染料与核酸的选择键合作用及其键合机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。 方法： 1.DNA负染检测方法：选用Eosin Y(EY)染料，考察影响检测结果的各个因素，如染色液的组成、固定时间、染色时间、显影时间，重点考察盐离子对检测结果的影响，建立DNA负染检测操作步骤； 2.为了更深入的研究检测机理，通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的结合的机制。 结果： 1.建立了DNA负染检测方法，灵敏度达0.2-0.6 ng/band，其操作步骤如下： (1)固定：电泳后，凝胶放入50 ml固定液固定10 min；固定液的组成为2.5%乙酸锌水溶液； (2)染色：在25 ml染色液中染色30 min；染色液的组成为0.4% EY/50%甲醇； (3)显影：在25 ml显影液中显影15 min；显影液的组成为2.0%乙酸锌/1%柠檬酸。 2.通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟法等多种研究手段来共同探究染料与DNA的结合机制，EY染料和DNA以沟槽形式相结合。 结论： 1.新建立的DNA负染检测方法其灵敏度达0.2-0.6 ng/band，可以和EB荧光染色法相媲美； 2.通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟法等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的结合的机制，EY染料和DNA以沟槽形式相结合。通过阐明EY染料与核酸的选择键合作用及其键合机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。