甘油磷酸胆碱的分离纯化、结构表征及其质量研究

摘要

随着人口老龄化，越来越多的人开始受到心脑血管疾病的困扰，包括记忆力下降、智力下降，以及老年痴呆。甘油磷酸胆碱(Glycerophosphorylcholine，alpha-GPC，GPC)，是磷脂酰胆碱(PC)分子上的两个脂肪酰基完全被水解掉的产物。它也是人体内正常存在的水溶性小分子物质，是重要的神经传递介质乙酰胆碱(Acetylcholine)的生物合成前体。有改善老年人的认知能力和记忆力及保护血管的作用。　　本论文是在实验室酶法制备GPC粗品的基础上，对其进行分离纯化，探讨了两种分离纯化方案，最终选择了用中性酸性氧化铝柱层析脱色法和离子交换树脂层析法相结合的工艺对GPC进行分离纯化，纯化后得到无色透明的高纯GPC，纯度达99.5％以上；确定了分离纯化的主要工艺流程并进行了放大试验，放大实验结果和实验小试的分离纯化结果相同。　　对纯化后的GPC用蒸发光散射检测器、高效液相色谱法测定其含量，并用红外(IR)、核磁(1H-NMR，1H-1H COSY，13C-NMR，13C-DEPT，13C-1H HSQC，13C-1H HMBC，31P-NMR)、质谱(MS)等技术确证其结构，结果红外的吸收峰能够得到合理的解释，所有的NMR信号能够得到合理的归属，质谱的裂解途径、离子特征与甘油磷酸胆碱的结构符合。　　在以上工作的基础上，通过影响因素(强光照射、高温、高湿)，加速和长期试验，采用蒸发光散射检测器，高效液相色谱法检测甘油磷酸胆碱原料药的含量变化，研究GPC的稳定性，该方法灵敏、准确，重现性好，研究结果表明GPC质量稳定性良好；通过气相色谱法测定了GPC中残余溶媒，检测到甲醇，其平均含量为7.37g/kg，其含量在药典规定的范围内。对GPC进行注射剂剂型研究，确定了处方的组成为注射用水和GPC主药，注射剂规格为4ml：1g，贮藏条件为：遮光、密闭保存。　　本研究结果为高纯度GPC的生产、制剂研发及其质量控制等提供科学可靠的基础数据。

目录

文摘

英文文摘

致谢

插图清单

表格清单

第一章 概 述

1.1 甘油磷酸胆碱概述

1.1.1.GPC有效性特点

1.1.2.GPC安全性特点

1.1.3.GPC耐受性特点

1.1.4.GPC临床定位

1.2 甘油磷酸胆碱研究进展

1.2.1 GPC适应症的临床特点

1.2.2 治疗老年痴呆症的常用药

1.2.3 GPC的研发现状

1.3 甘油磷酸胆碱药理作用和作用机制

1.4 研究的目的和意义

1.4.1 研究目的

1.4.2 研究意义

1.4.3 课题的研究方案

第二章 甘油磷酸胆碱的分离纯化条件选择

2.1 引言

2.2 实验材料

2.2.1 GPC粗品

2.2.2 主要材料与试剂

2.2.3 主要实验设备

2.3.实验方法

2.3.1 实验所用材料预处理

2.3.2 溶解GPC粗品溶剂的选择

2.3.3 酸性氧化铝对GPC粗品脱色条件选择

2.3.4 酸性氧化铝与GPC粗品质量比为10：1时的脱色研究

2.3.5 薄层色谱法分析GPC时展开剂的选择

2.3.6 GPC进一步分离纯化方法的选择

2.3.7 酸性氧化铝再生研究

2.4.实验结果

2.4.1 硅胶柱层析结果

2.4.2.离子交换树脂层析结果

2.4.3.酸性氧化铝再生结果

2.4.4.最优分离纯化工艺步骤

2.5.本章小结

第三章 甘油磷酸胆碱的结构确证研究

3.1.引言

3.2.实验材料

3.2.1.GPC样品

3.2.2.主要实验设备

3.3.实验方法

3.3.1 红外光谱检测

3.3.2 紫外光谱检测

3.3.3 核磁共振谱

3.3.4 质谱

3.3.5 比旋度测定

3.4.结果与讨论

3.4.1.红外光谱检测结果

3.4.2.紫外光谱检测结果

3.4.3.核磁共振检测结果

3.4.4.质谱检测结果

3.4.4.比旋度结果

3.5.本章小结

第四章 甘油磷酸胆碱的质量研究

4.1.引言

4.2.实验材料

4.2.1.GPC样品

4.2.2.GPC对照品

4.2.3.主要材料与设备

4.3.实验方法

4.3.1.GPC含量检测

4.3.2.GPC稳定性研究

4.3.3.GPC中残余溶媒研究

4.4.结果与讨论

4.4.1.含量检测结果

4.4.2.GPC稳定性研究研究结果

4.5 本章小结

第五章 甘油磷酸胆碱注射液制备工艺研究

5.1 引言

5.2 实验材料

5.2.1 GPC样品

5.2.2 主要试剂与仪器

5.3 实验方法

5.3.1.色谱条件

5.3.2.处方与规格

5.3.3.GPC注射剂的制备

5.3.4 活性炭对主药的吸附情况的影响

5.3.5 PH值对主药性状的影响

5.3.6 注射剂稳定性考察

5.4 结果与讨论

5.4.1 活性炭对主药吸附情况的影响

5.4.2 PH值对主药性状的影响

5.4.3 影响因素实验对注射剂稳定性的影响

5.5 本章小结

第六章 结论与展望

6.1 结论

6.2.展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文