色氨酸--2,3--双加氧酶2在胶原诱导关节炎小鼠免疫细胞中的表达及其对巨噬细胞吞噬功能的调控作用和机制

目录

声明

英文缩略词表 (Abbreviation)

1 前言

2 实验材料

2.1 动物

2.2 细胞株

2.3 药物与试剂

2.4 主要溶液配制

2.5 仪器与设备

3 实验方法

3.1 免疫组化法检测DBA/1小鼠组织中TDO2蛋白的表达

3.2 RT-qPCR法检测DBA/1小鼠组织中TDO2的mRNA表达

3.3 DBA/1小鼠脾脏和淋巴结免疫细胞的分离

3.4 流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达

3.5 成像流式细胞术检测DBA/1小鼠脾脏T、B细胞亚群、NK和DC中TDO2表达

3.6 小鼠腹腔巨噬细胞的分离、原代培养和鉴定

3.7 激光共聚焦法检测DBA/1小鼠PM中TDO2的表达

3.8 小鼠CIA模型的建立

3.9 CIA小鼠胸腺指数和脾脏指数测定

3.10 CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏病理的观察

3.11 RT-qPCR法检测CIA小鼠腹腔巨噬细胞中TDO2 mRNA的表达

3.12 Raw264.7细胞株的分组处理

3.13 RT-qPCR法检测Raw264.7细胞中TDO2和EP4的mRNA表达

3.14 比色法检测Raw264.7细胞上清中Kyn含量

3.15 流式细胞术检测Raw264.7细胞的吞噬功能

3.16 统计学处理

4 结果

4.1 DBA/1小鼠各种组织中TDO2 mRNA和蛋白表达

4.2 TDO2在DBA/1小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达

4.3 TDO2在DBA/1小鼠免疫细胞中的表达

4.4 TDO2在DBA/1小鼠PM中的表达

4.5 CIA小鼠的整体指标评价和病理学变化

4.6 TDO2在CIA小鼠踝关节、脾脏和肝脏中的表达

4.7 TDO2在CIA小鼠脾脏和肠系膜淋巴结免疫细胞中的表达

4.8 TDO2在CIA小鼠PM细胞中的表达

4.9 TDO2 siRNA最佳序列的选择

4.10 TDO2对Raw264.7细胞吞噬功能的影响

4.11 PGE2不同浓度刺激后对Raw264.7细胞的吞噬能力以及对TDO2表达和酶活性的影响

4.12 EP4选择性激动剂对Raw264.7吞噬功能和TDO2 mRNA表达和活性的影响

4.13 TDO2对Raw264.7细胞EP4 mRNA表达的影响

5 讨论

5.1 TDO2广泛表达在DBA/1小鼠的组织和免疫细胞中

5.2 TDO2参与CIA小鼠的疾病进程

5.3 PGE2-EP4-TDO2通路参与调控巨噬细胞的吞噬功能

6 结论

参考文献

附录

致谢

综述:色氨酸-2,3-双加氧酶2：治疗癌症、神经退行性疾病和炎症的潜在靶点