褪黑素通过调节细胞内钙稳态改善急性坏死性胰腺炎

摘要

目的：观察大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)胰腺组织损伤时胰腺细胞中肌浆网钙ATP酶(sarco/endoplasmic reticulumCa2+-ATPase，SERCA)和细胞膜上钠钙交换蛋白(Na+/Ca2+exchanger，NCX)表达的变化，探讨褪黑素对大鼠急性坏死性胰腺炎的保护作用是否通过减轻细胞内钙超载来实现的。
　　 方法：
　　 1.取雄性SD大鼠96只，采用随机区组设计，随机分为假手术组(SO)、褪黑素对照组(MC)，急性坏死性胰腺炎组(ANP)、褪黑素干预组(MT)。采取经胰管逆行注射4％牛黄胆酸钠法制造急性坏死性胰腺炎模型。假手术组仅开腹后翻动胰腺;褪黑素对照组则于30分钟前腹腔注射褪黑素(50mg/kg)，余方法同假手术组;褪黑素干预组则在制造急性坏死性胰腺炎模型前30分钟腹腔注射褪黑素(50mg/Kg)。手术后每只大鼠皮下补充生理盐水2ml。
　　 2.造模成功后分别于1h，4h，8h时处死大鼠，各组各时点8只。与大鼠下腔静脉抽取5ml静脉血，3000rpm/min离心后留取上层血清，置-20℃冰箱保存备用。取新鲜胰腺组织分成四部分，一部分固定于4％多聚甲醛液中，用于组织病理学检测;第二、三部分分别置冻存管中于-80℃冰箱中保存，待行realtime RT-PCR和western blotting检测;第四部分新鲜组织体外消化为单细胞悬浮液，进行细胞内钙离子(Ca2+)测定。
　　 3.用生化自动分析仪检测血清淀粉酶(AMY)含量。
　　 4.苏木精一伊红染色观察胰腺组织病理变化，进行病理学评分。用分光光度计检测不同时间段腺泡细胞内钙离子变化。realtime RT-PCR和westernblotting检测SERCA和NCX的表达。
　　 5.计量资料以((x)±s)表示，应用SPSS15.0统计软件进行分析，进行正态性检验和方差齐性分析、完全随机设计单因素方差分析，结果以P＜0.05有统计学意义。
　　 结果：
　　 1.血清淀粉酶与SO、MC组相比，ANP组和MT组血清淀粉酶都升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。MT组血清淀粉酶各时点均较ANP组相应时点有所下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。在ANP组中血清淀粉酶值随着急性坏死性胰腺炎时间的延长而升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 2.胰腺组织病理变化及评分同SO及MC组比较，MT组和ANP组胰腺组织均显示不同程度的病理损害。同ANP组相比，MT组胰腺组织病理损伤较ANP组相应时点减轻。
　　 3.腺泡细胞内钙离子与SO、MC组相比，ANP组和MT组细胞内钙离子都升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。MT组细胞内钙离子各时点均较ANP组相应时点有所下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。在ANP组中4h时间点的钙离子浓度比1h时增多，差异有统计学意义（P＜0.05），但8h与4h时间点的细胞内钙离子无明显差别，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　 4.SERCA和NCX mRNA与蛋白质的表达与SO、MC组相比，ANP和MT组相应时间点的SERCA和NCXmRNA与蛋白质的相对表达量减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。MT组中这两者的表达量较ANP组相应时间点有所增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。在ANP组中4 h时间点的SERCA和NCX mRNA与蛋白质的表达量比1h时减少，差异有统计学意义（P＜0.05），但8h与4h时间点的两者表达量无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　 结论：褪黑素能促使急性坏死性胰腺炎腺泡细胞内钙离子浓度的降低及上调SERCA和NCX的表达，调节细胞内钙稳态，对急性坏死性胰腺炎有保护作用。

目录

缩略词表(按字母顺序)

摘要

前言

材料和方法

一、材料

二、方法

结果

1．胰腺组织病理检查及评分

2．血清淀粉酶变化

3．腺泡细胞内钙离子浓度变化

4．胰腺组织SERCA2和NCX1 mRNA的表达

5．胰腺组织SERCA2和NCX1蛋白的表达

讨论

参考文献

附录

致谢

综述 正急性胰腺炎与钙超载作用机制的研究

声明