冬凌草甲素通过MAPK-p38信号通路增强吉西他滨对胰腺癌的抗肿瘤活性

摘要

目的：
　　 探讨冬凌草甲素在体内外能否增强吉西他滨对胰腺癌抗肿瘤效应及其可能的作用机制。
　　 方法:
　　 在体外，不同浓度的冬凌草甲素(0μM，20μM，40μM，60μM，80μM，100μM)作用胰腺癌BXPC-3细胞24 h，48 h，72 h后，CCK-8法检测胰腺癌细胞株BXPC-3细胞的增值;冬凌草甲素(40μM)与吉西他滨(20μM)单独及联合处理细胞48小时，并设立对照组，采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的分布;运用RT-PCR检测冬凌草甲素(40μM)单独及联合吉西他滨(20μM)作用48小时后BXPC-3细胞中p38与p53基因的表达水平;蛋白印迹法(Western blot)检测冬凌草甲素(40μM)单独及联合吉西他滨(20μM)作用48小时后BXPC-3细胞中p38与p53相应蛋白的表达水平。在体内，我们建立胰腺癌BXPC-3细胞的裸鼠皮下移植瘤动物模型，待到肿瘤体积达到一定大小时，按照随机区组设计分配分成4个实验组:生理盐水组（对照组），吉西他滨组(80 mg/kg)，冬凌草甲素组(40 mg/kg)，联合用药组（吉西他滨80 mg/kg+冬凌草甲素40 mg/kg）。每组10只，各组给药均采用腹腔注射的方法，每3天一次，共11次。末次用药结束2周后，取出肿瘤，测量肿瘤体积并称肿瘤重量;Western blot法检测各组瘤组织中p-p38和p-p53蛋白的表达;采用RT-PCR检测各组瘤组织中p38和p53基因的表达。
　　 结果:
　　 冬凌草甲素抑制胰腺癌BXPC-3细胞的增值呈明显的剂量与时间依赖性，冬凌草甲素作用胰腺癌细胞48小时后，IC50值为38.86μM;运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡结果示:冬凌草甲素或吉西他滨单独作用时，BXPC-3细胞的凋亡率明显高于对照组细胞的凋亡率(P＜0.05)，当吉西他滨联合冬凌草甲素处理细胞时，BXPC-3细胞的凋亡率较其他组均显著增多(P＜0.05);流武细胞仪(FCM)检测细胞周期的分布结果示:对照组相比，40μM冬凌草甲素作用BXPC-3细胞48小时后，G1期细胞比例明显增加，提示冬凌草甲素将BXPC-3细胞阻滞在G1期;当冬凌草甲素(40μM)与吉西他滨(20μM)单独及联合处理BXPC-3细胞48 h后，运用RT-PCR与Western blot方法检测结果示:冬凌草甲素组及联合组都可以上调BXPC-3细胞中p38与p53的基因及蛋白表达(P＜0.05)，但冬凌草甲素联合吉西他滨处理后BXPC-3细胞中p38与p53的基因及蛋白表达较其余各组均显著增加(P＜0.05)。在体内，冬凌草甲素组与联合组裸鼠移植瘤的平均体积和平均重量均较对照组明显下降(P＜0.05)，但联合组下降的更为显著(P＜0.05);Western blot与RT-PCR结果显示;冬凌草甲素与吉西他滨单独处理后瘤组织中p38和p53的磷酸化蛋白及基因的表达水平明显高于对照组(p＜0.05)，联合用药组p38和p53的磷酸化蛋白及基因的表达水平上调最显著(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 冬凌草甲素在体内外能显著增强吉西他滨对胰腺癌BXPC-3细胞的抗瘤效果，其机制可能是冬凌草甲素通过促进胰腺癌BXPC-3细胞或裸鼠移植瘤组织中p38的表达，活化的p38再激活p53的表达从而增强吉西他滨对胰腺癌BXPC-3细胞的促凋亡作用，达到增强吉西他滨在体内外的抗瘤作用。因此，冬凌草甲素在胰腺癌的治疗中可以作为一个新的治疗选择。

目录

摘要

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

结果

1．冬凌草甲素抑制胰腺癌BXPC-3细胞的增殖

2．冬凌草甲素可显著增强吉西他滨对胰腺癌BXPC-3细胞的促进凋亡作用

3．冬凌草甲素引起胰腺癌BXPC-3细胞的周期分布不均

4．冬凌草甲素和吉西他滨单用和联合用药对胰腺癌BXPC-3细胞p38和p53基因表达的影响

5．冬凌草甲素对吉西他滨诱导的P-P38和P-P53蛋白在体外表达的影响

6．冬凌草甲素增强吉西他滨对胰腺癌移植瘤的生长抑制作用

7．冬凌草甲素联合吉西他滨上调移植瘤组织中p-p38与p-p53的蛋白表达

7．冬凌草甲素联合吉西他滨上调移植瘤组织中p38与p53的基因表达

分析与讨论

小结

参考文献

附录

致谢

综述 冬凌草甲素抗肿瘤作用的机制

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