鸡组织中的阿德呋啉残留的LC-MS/MS检测方法及消除规律的研究

摘要

阿德呋啉属核苷酸类化合物，是一种高效、广谱、低毒的新型抗球虫药物，对柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫都有效。然而如果阿德呋啉使用不当，可能会造成其在动物体内残留，影响动物性食品的安全性，危害人体的健康，所以必须对其在动物体内的残留情况进行监控。为了更简单、快速、准确地分析阿德呋啉药物，本试验研究建立了鸡组织中阿德呋啉药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法，可为鸡组织中阿德呋啉药物残留的监督检验和国内的残留监控提供技术支持，并为进一步研究阿德呋啉在鸡体内的消除规律提供研究方法。　　本文建立了鸡组织中样品中阿德呋啉药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法，并研究其在鸡体内的消除规律。肌肉、肝脏、肾脏样品经二氯甲烷提取，60℃旋转蒸发浓缩，残渣用40％甲醇溶解，正己烷去脂，C18固相萃取柱净化，血浆样品沉淀蛋白后直接经C18固相萃取小柱萃取净化，以Luna C18（2）色谱柱（5μm，150mm×2.00mm）分离，用0.1%甲酸-甲醇溶液和0.1%甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，电喷雾正离子模式（ESI+）电离，多反应监测模式（MRM）检测，外标法定量。鸡单剂量灌服给药后，定点采集血样和组织样，用建立的LC-MS/MS法进行测定，再用3P97药动学软件进行数据分析。　　结果显示：阿德呋啉在1～200μg/kg(μg/L)的范围内线性良好，r2均大于0.999，阿德呋啉在血浆、肌肉、肝脏、肾脏样品中的检出限分别为0.6μg/L、0.3μg/kg、0.6μg/kg、0.3μg/kg，定量限依次为2.0μg/L、1.0μg/kg、2.0μg/kg、1.0μg/kg。以5、20、50μg/kg(μg/L)三个水平进行添加回收试验，四种组织中阿德呋啉的平均回收率为80.3%～94.9%，日内相对标准偏差为2.2%～7.1%，日间相对标准偏差为2.2%～6.8%。该方法简便、快速、准确、灵敏度高，适用于鸡组织中阿德呋啉药物残留的确证和定量检测。房室模型分析表明：单剂量口服给药后血浆中阿德呋啉药物为一级吸收二室开放模型，主要药动学参数为：吸收半衰期t1/2ka=0.75 h，消除半衰期t1/2β=11.13 h，达峰时间Tmax=1.73h，达峰浓度Cmax=184.98 ng/mL，药时曲线下面积AUC=1363.75.62(ng/mL)·h；组织分布研究表明：阿德呋啉在肌肉、肝脏、肾脏组织中均属于一级吸收二室开放模型，阿德呋啉主要分布在肝脏和肾脏中，在三种组织中吸收半衰期（t1/2ka）为肌肉<肾脏<肝脏，分布半衰期（t1/2α）为肝脏<肾脏<肌肉，消除半衰期（t1/2β）为肾脏<肝脏<肌肉。

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文献综述

引言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 试验方法

2 结果与分析

2.1 血浆样品前处理的结果与分析

2.2 组织样品前处理的结果与分析

2.3 质谱条件的优化结果与分析

2.4 液相色谱条件的优化结果与分析

2.5 试验方法的评价

2.6 阿德呋啉在鸡体内的药物动力学规律

3 讨论

3.1 样品的提取与净化

3.2 质谱测定条件的选择与优化

3.3 色谱分离条件的优化

3.4 基质效应的考察

3.5 阿德呋啉在鸡体内药动学规律的分析

4 结论

4.1 建立了阿德呋啉在鸡血浆、肌肉、肝脏、肾脏四种组织中的残留检测前处理方法

4.2 建立了检测鸡组织中阿德呋啉药物残留的LC-MS/MS方法

4.3 分析了阿德呋啉在鸡血浆中的药动学规律

4.4 分析了阿德呋啉在鸡组织中的分布和消除规律

参考文献

致谢

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