肝内胆管结石与Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因Pst I位点多态性的关系研究

摘要

目的:分析中国台州地区人群载脂蛋白AⅠ-CⅢ-AⅣ基因簇(ApolipoproteinAⅠ-CⅢ-AⅣ，ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ)的PstⅠ酶切位点的多态性。分析中国台州地区Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因的的PstⅠ酶切位点的各基因型及等位基因频率与肝内胆管结石易感性(the happening of hepatolithiasis)的关系。探讨Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因的PstⅠ酶切位点的多态性参与肝内胆管结石发病的机制。探索ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因的的PstⅠ酶切位点多态性对于肝内胆管结石的诊断和治疗的意义。
　　 方法:选取2006年10月到2010年10月期间在温州医学院附属台州医院住院并行肝脏部分切除术的患者64例，所有64例患者均经术后病理诊断确诊为肝内胆管结石;另选取2007年1月到2009年1月期间在浙江台州医院健康管理中心体检的健康志愿者130例，所有志愿者均排除肝胆系统疾病。以上所有研究对象均为台州汉族人群，且相互间无亲缘关系。所有标本均通过知情同意下取得，且研究方案经得医院认可。
　　 用SPSS软件比较实验组64例和对照组120例研究对象之间的性别和年龄构成情况，采用LSD-t检验比较两组研究对象之间的年龄差异，采用卡方检验(x2)比较两组研究对象之间的性别构成差异。
　　 收集实验组研究对象的病变肝脏组织，集中保存于-80℃，液氮研磨后采用组织DNA提取试剂盒提取肝组织全基因组DNA;收集对照组研究对象外周血，采用含EDTA-K2抗凝剂的采血管，用血液DNA提取试剂盒提取外周血白细胞全基因组DNA。
　　 设计针对目的基因片段的上下游引物并由生物公司合成，以上述所提得DNA为模板行聚合酶链式反应(PCR)，反应产物行1.5％琼脂糖凝胶电泳验证片段大小及其特异性;另取一部分PCR产物做PstⅠ内切酶酶切，酶切产物行琼脂糖凝胶电泳，根据限制性片段长度多态性(RFLP)分析结果判断各标本该位点的基因型。
　　 采用x2检验对两组研究对象的基因型进行Hardy-Weinberg平衡检验，同时用x2检验对两组研究对象的基因型及等位基因频率进行比较，分析是否存在统计学差异。
　　 结果:
　　 1.针对研究对象的临床资料分析显示实验组64例肝内胆管结石患者和对照组130例正常体检者的性别、年龄等肝内胆管结石的可能影响因素间的差异无统计学意义。
　　 2.实验组64例患肝内胆管结石且无胆囊结石者病变肝脏组织标本及对照组130例正常体检者外周血均成功抽提得DNA;实验组DNA浓度为230.9±86.0ng/ul，对照组DNA浓度为234.4±92.2 ng/ul，两组比较差异无统计学意义;实验组DNA吸光度比值A260/A280为1.71±0.172，对照组DNA吸光度比值A260/A280为1.75±0.185，两组比较差异无统计学意义。
　　 3.实验组64例肝内胆管结石患者病变肝脏组织标本应用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳技术检测Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因目的片段，检出64例，检测阳性率为100％(64/64)。对照组120例正常体检者外周血标本应用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳技术检测ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因目的片段，检出130例，检测阳性率为100％(130/130)。
　　 4.研究人群中存在Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ酶切位点多态性，酶切结果显示其基因型分别为AA、AC、CC，实验组64例肝内胆管结石患者和对照组130例正常体检者各基因型频率均符合遗传学的Hardy-Weinberg平衡。
　　 5.肝内胆管结石组中AA、AC、CC基因型频率分别为95.3％、4.7％、0.0％，正常对照组中AA、AC、CC基因型频率分别为90.0％、10.0％、0.0％。肝内胆管结石组和正常对照组各基因型频率的比较（x2=1.599，P=0.206）和等位基因频率的比较（x2=1.531，P=0.216）差异均无统计学意义。
　　 结论:Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ位点多态性可能与肝内胆管结石的易感性不相关;两者之间的更确切关系有待扩大研究区域及扩大样本量的进一步研究;与肝内胆管结石相关的基因水平的研究可能需要从除了胆固醇代谢相关基因之外的方面做深入探讨。

目录

摘要

缩略词表

引言

材料与方法

1．实验材料

2．研究方法

结果

1．诊断结果

2．研究对象一般资料

3．DNA抽提产物结果

4．PCR最适条件探索

5．PCR结果

6．酶切后电泳结果

7．DNA测序

8．肝内胆管结石组患者和正常体检者基因型和等位基因频率比较结果

9．Hardy-Weinberg平衡检验

分析与讨论

小结

参考文献

附录

致谢

综述 正载脂蛋白A1基因多态性研究进展

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