辣椒素对胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤作用的实验研究

摘要

目的:观察辣椒素(capsaicin)对胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用情况并通过一系列实验方法来探讨其可能的作用机制。
　　 方法:在体外进行胰腺癌PANC-1细胞的复苏、培养与传代;取处于对数生长期的细胞接种于适龄裸鼠的皮下，建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型。在胰腺癌PANC-1细胞接种后4周将裸鼠随机分为四组:对照组（N组，0.9％生理盐水），低浓度辣椒素组（C1组，辣椒素1 mg/kg），中浓度辣椒素组（C3组，辣椒素3 mg/kg），高浓度辣椒素组(C5组，辣椒素5 mg/kg)，每组10只。各组均采用灌胃的给药方式，每周三次（周一，周三，周五），共持续四周。给药过程中每周称量一次裸鼠体重，测量皮下瘤的大小以计算体积并绘制生长曲线。停药一周后处死裸鼠，解剖剥离肿瘤，观察各组移植瘤组织情况，称量瘤重，测量瘤体，计算抑瘤率。移植瘤组织采用透射电镜观察各组移植瘤细胞超微结构。采用TUNEL法检测各组移植瘤细胞凋亡的情况。采用免疫组织化学法检测各组移植瘤内质网应激特异分子葡萄糖调控蛋白-78(GRP78)，生长阻滞-DNA损伤诱导基因153(GADD153)及凋亡分子半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白的表达情况。采用Western blot法检测各组移植瘤GRP78，GADD153，cleaved caspase-3蛋白的表达情况。采用RT-PCR法检测各组移植瘤GRP78，GADD153，caspase-3 mRNA的表达情况。
　　 结果:
　　 1.实验过程中各组裸鼠体重均有不同程度的下降，而以高浓度辣椒素组(C5组)下降较快。处死裸鼠时称量各组裸鼠体重，对照组（N组）、低浓度辣椒素组(C1组)、中浓度辣椒素组(C3组)体重差别不大，高浓度辣椒素组（C5组）体重最轻（与其他各组相比P＜0.05）。各组移植瘤体积在给药过程中均有不同程度的增大，对照组（N组）和低浓度辣椒素组(C1组)瘤体增长较快，中浓度辣椒素组(C3组)和高浓度辣椒素组（C5组）组增长较缓。处死裸鼠时随辣椒素浓度增加，裸鼠移植瘤体积及终末瘤体质量越小，中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）分别与对照组（N组）相比，差异均有统计学意义。
　　 2.透射电镜观察下各组移植瘤细胞超微结构，对照组（N组）、低浓度辣椒素组(C1组)细胞超微结构相对正常，中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）细胞内质网扩张，线粒体肿胀，出现凋亡征象。
　　 3.TUNEL法检测各组移植瘤组织细胞凋亡，与对照组（N组）及低浓度辣椒素组(C1组)相比，中浓度辣椒素组（C3组）、高浓度辣椒素组（C5组）凋亡细胞显著多且荧光强度更强，累计光密度值显著增高，中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）分别与对照组（N组）相比差异均有统计学意义。
　　 4.免疫组织化学染色法结果显示，与对照组（N组）相比，随着辣椒素浓度增高，GRP78，GADD153，caspase-3蛋白的表达也增高，中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）分别与对照组（N组）相比，差异均有统计学意义。
　　 5.Western Blot法结果显示，随着辣椒素浓度增高，各组GRP78，(GADD153，cleaved caspase-3蛋白的表达也不断增强，尤以中浓度辣椒素组(C3组)和高浓度辣椒素组（C5组）增强明显，相对灰度值中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）与对照组（N组）相比显著增高，差异均有统计学意义。
　　 6.RT-PCR法结果显示，随着辣椒素浓度的增高，GRP78，GADD153，caspase-3 mRNA的表达也不断增强，尤以中浓度辣椒素组(C3组)和高浓度辣椒素组（C5组）增强明显，相对灰度值中浓度辣椒素组(C3组)、高浓度辣椒素组（C5组）与对照组（N组）相比显著增高，差异均有统计学意义。
　　 结论:
　　 1.辣椒素对胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤的生长有抑制作用。
　　 2.辣椒素对胰腺癌PANC-1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用有浓度依赖性，低浓度（C1组）组抑制作用不明显，而中浓度组（C3组）和高浓度组（C5组）抑制作用显著。高浓度辣椒素对裸鼠的副作用较大，中浓度辣椒素抑瘤效果好且副作用小。
　　 3.辣椒素对移植瘤的抑制作用与其能诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡有关。
　　 4.辣椒素可通过内质网应激介导的细胞凋亡途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡。

目录

英文缩写一览表

摘要

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

结果

1．辣椒素对裸鼠体重以及移植瘤体积、质量的影响

2．透射电镜观察各组移植瘤细胞超微结构

3．TUNEL法检测移植瘤组织细胞凋亡情况

4．免疫组织化学法检测移植瘤GRP78， GADD153，caspase-3蛋白表达情况

5．Western Blot法检测移植瘤组织GRP78，GADD153，caspase-3 蛋白的表达情况

6．RT-PCR法检测移植瘤组织GRP78，GADD153，caspase-3 mRNA的表达情况

分析与讨论

小结

参考文献

附录

致谢

综述 内质网分子伴侣GRP78在肿瘤的发生及抗肿瘤中的作用

声明