不同EGFR基因突变检测方法在选择性非小细胞肺癌石蜡标本检测中的探索

摘要

研究背景:每年全世界肺癌新发病例大约1,200,000,其中80％以上为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC),而且大多数诊断时已是晚期,虽经目前的标准方案治疗,其预后仍然不佳。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种酪氨酸激酶,与肿瘤的发生、生长及转移有关,常常在NSCLC中过表达。因此,EGFR是肿瘤治疗最有前景的治疗靶点之一。EGFR基因突变与小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)吉非替尼和厄洛替尼的临床反应有关,而且在亚裔、女性、非吸烟、腺癌患者中EGFR突变率高,因此EGFR基因突变是非小细胞肺癌患者EGFR-TKI靶向治疗有效的强的预测因子。目前使用的检测EGFR基因突变的方法往往受肿瘤标本限制很难适用于每一个病人,特别是晚期肺癌患者,因此灵敏、方便快捷、经济的检测方法正是临床所迫切需要的。　　目的:通过比较荧光定量特异引物双扩增系统(又称ADx-ARMS)和直接测序法在检测45例选择性NSCLC手术或活检标本EGFR基因突变的局限,探讨ADx-ARMS法用于临床常规检测NSCLC标本EGFR基因突变的可行性。　　方法:选取安徽省立医院胸外科非吸烟或少量吸烟的45例手术的NSCLC患者,将福尔马林固定石蜡包埋的手术标本用显微切割技术获取肿瘤组织细胞,采用QIAamp DNA提取试剂盒提取基因组DNA,通过ADx-ARMS及DNA直接测序技术分析NSCLC患者中EGFR基因突变情况。　　结果:45例NSCLC中,ADx-ARMS检测有29例存在EGFR基因突变,突变检出率为64.4%,其中22例为外显子19的缺失突变,6例为外显子21点突变,1例为外显子19和21的共同突变。直接测序检测出12例EGFR基因突变,突变检出率为26.7%,其中9例为外显子19的缺失突变,3例为外显子21点突变,与ADx-ARMS检测结果一致。非鳞癌EGFR基因突变率84.8%(28/33)显著高于鳞癌患者8.3%(1/12);女性患者的突变率为83.3%(20/24)高于男性患者42.9%(9/21);两者之间的差异均具统计学意义(P值分别为P=0.000,P=0.005)。　　结论:在单中心选择性NSCLC手术标本中ADx-ARMS法及直接测序法均能检测出EGFR基因的突变。该中心EGFR突变以外显子19的缺失突变和外显子21的点突变为主,在非鳞癌和女性中EGFR基因突变发生显著。相比直接测序,ADX-ARMS的方法更灵敏,快捷,准确的检测EGFR基因突变。

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1前言

2.材料和方法

2.1 材料

2.2一般资料

2.3 主要试剂与仪器

2.4 实验步骤方法

2.5统计学分析

3．结果

3.1 EGFR基因突变与肺癌组织类型及临床特征之间的关系

3.2 ADx-ARMS法检测EGFR基因突变情况与临床病理特点的关系

3.3 DNA直接测序检测EGFR基因突变情况与临床病理特点的关系

3.4 ADx-ARMS法及DNA直接测序法结果比较

4 讨论

4.1 EGFR结构和功能

4.2 EGFR的检测

4.3 EGFR基因突变与临床特征的关系及临床意义

5.结论

5.1问题与展望

展望：

参考文献

附录

致谢

综述