维拉帕米是否通过细胞间缝隙连接通讯的改变来逆转肺腺癌的耐药性

摘要

目的：本文探讨应用耐药逆转剂维拉帕米后，肺腺癌细胞株A549及其耐药细胞株A549/T细胞间缝隙连接通讯和细胞内钙浓度的变化，并探讨所产生的机制。 方法：先选择有效的耐药逆转剂--维拉帕米，通过MTT法明确其能逆转A549/T对紫杉醇的耐药性及逆转能力。接着通过流式细胞仪测定在应用维拉帕米不同浓度和不同时间后，两种细胞株上MRP1和CX43的表达变化的情况。最后用激光共集焦显微镜测定应用维拉帕米不同浓度和不同时间后，两种细胞株细胞内钙离子浓度变化以及检测两者GJIC功能。 结果：第一部分：A549/T对紫杉醇的耐药倍数是A549的50-80倍，而加用不同浓度的维拉帕米后均可见其耐药倍数明显下降，给予维拉帕米10-20ug/ml之间耐药倍数基本上维持在敏感株2倍左右。 第二部分：A549/T细胞镆上MRP1水平明显高于A549细胞(65.22±1.74％Vs1.69±0.32％，P＜0.01)，维拉帕米的应用可以明显减小耐药株MRP1水平且与时间和浓度相关；A549/T的连接蛋白CX43水平也明显低于敏感(4.11±0.41％vs12.49±0.37％,P＜0.05)，给予维拉帕米后耐药株上CX43水平也随浓度和时间延长而升高(耐药株加V20ug/ml×72h12.49±0.37)，相关性分析表明这两项指标呈现负相关。 第三部分：敏感细胞内钙含量高于耐药细胞株(25.90±2.06vs13.91±1.91，P＜0.01)。应用维拉帕米后，两株细胞内的钙浓度均随给药时间的延长和维拉帕米浓度的增加而增加，但在10-20ug/ml浓度下两种细胞株钙的变化均无显著差异。两组细胞株GJIC的功能在给药前后未均恢复。相关性分析发现在耐药细胞株中钙的变化与MRP1呈负相关(r=-0.768,P=0.044)，耐药细胞株中钙的变化与CX43呈正相关(r=0.916，P=0.004)。 结论：肺腺癌A549/T对紫杉醇的耐药性的机制之一可能是通过MRP1外排紫杉醇，维拉帕米能够随浓度的增加明确逆转A549/T对紫杉醇的耐药性。维拉帕米逆转耐药的机制可能是通过调节细胞内钙浓度变化，来降低MRP1表达；虽然维拉帕米能上调耐药细胞株细胞膜上CX43的表达含量，但并不能改善GJIC，推断肺腺癌对紫杉醇耐药性的发生和逆转与GJIC无关。

目录

英文缩写一览表

前 言

材料和方法

实验结果

讨论

结 论

参考文献

附 图

综述一 肿瘤微环境与多药耐药的关系

综述二 细胞间通讯在细胞生长控制和肿瘤形成中的地位

致 谢