CREB磷酸化调控参与海马神经元过度兴奋神经损伤机理研究

摘要

目的：神经元过度兴奋与癫痫、中风及部分神经退行性疾病中的神经元损伤坏死有关，会导致严重的认知和运动障碍，但是其作用机制尚未阐明。本文采用红藻氨酸（Kainic acid，KA）诱导的神经元过度兴奋模型，探讨钙调神经磷酸酶(Calcineurin，CaN)调节CREB和BAD蛋白质磷酸化对神经元功能和结构的影响。
　　方法：建立红藻氨酸诱导的神经元过度兴奋大鼠模型，给予CaN抑制剂他克莫司（Tacrolimas，FK506）干预对比生理盐水处理的大鼠；用Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力变化情况；甲苯胺蓝染色用以观察大鼠海马神经元数量及结构变化；用蛋白质印迹(western blot)检测大鼠海马P-CREB和P-BAD蛋白的表达水平情况。
　　结果：Morris水迷宫试验检测发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性后与对照组相比学习、空间记忆能力有明显提高。甲苯胺蓝染色可以观察到大鼠海马CA3区神经细胞缺失，给予FK506抑制CaN活性后神经细胞缺失情况有显著改善。Western blot分析发现神经元过度兴奋大鼠抑制CaN活性对比生理盐水组大鼠海马区P-CREB和P-BAD蛋白表达水平增加。
　　结论：FK506处理可以削弱神经元过度兴奋对神经元功能和结构影响，减少大鼠海马神经元损失从而提高大鼠学习、记忆能力。FK506处理还导致大鼠海马CaN下游CREB和BAD磷酸化水平显著增加，同时伴随海马区神经细胞丢失减少，揭示CaN激活可能参与神经细胞死亡调控，在神经元过度兴奋损伤过程中起重要作用。

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第一章 绪 论

1.1神经元过度兴奋相关退行性变疾病

1.2神经元过度兴奋模型

1. 3钙调神经磷酸酶

1.4 CaN与关键蛋白磷酸化

1.5 CaN抑制剂

1.6研究思路

1.7技术路线

第二章 神经元过度兴奋大鼠学习记忆能力和海马结构变化

2.1 材料和仪器

2.2 实验方法

2.3 实验结果

2.4 讨论

2.5 结论

第三章 FK506影响P-CREB和P-BAD在神经元过度兴奋大鼠海马中表达

3.1材料和试剂

3.2实验方法

3.3 实验结果与分析

3.4 讨论

3.5 结论

第四章 总结和展望

4.1 工作总结

3.5 展望

致谢

参考文献

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