慢性海洛因给药大鼠海马神经元阿片受体表达和CREB磷酸化研究

摘要

目的：观察慢性海洛因给药后SD大鼠海马DOR和MOR的表达，及给药过程中DOR与CREB磷酸化的相互关系；外转Myc-DOR、MOR-Flag到HEK293细胞，急性海洛因处理DOR、MOR及CREB磷酸化的表达变化。
　　 方法：大鼠持续给药10天，每天给药两次。实验大鼠分为6组：Saline（NS）组：腹腔给予生理盐水0.2 ml；Heroin组：腹腔给予海洛因10 mg/kg：Naloxone+NS组：先腹腔给予Naloxone20mg/kg，30 min后皮下给予生理盐水0.2 ml；Naloxone+Heroin组：先腹腔给予Naloxone20 mg/kg，30 min后腹腔给予海洛因10 mg/kg；Naltrexone+NS组：先腹腔给予Naltrexone20 mg/kg，30 min后皮下给予生理盐水0.2 ml一次；Naltrexone+Heroin组：先腹腔给予Naltrexone20 mg/kg，30 min后腹腔给予海洛因10 mg/kg。实验大鼠在最后一天注射1小时后取材检测。通过免疫组化、蛋白印迹、RT-PCR等技术，检测DOR、MOR及pCREB的表达。外源转染MOR-Flag、Myc-DOR、Mutation Myc-DOR到HEK293细胞，通过免疫蛋白印迹检测海洛因刺激10 min DOR和MOR的磷酸化水平、刺激30 min后HEK293细胞中pCREB的变化。
　　 结果：
　　 （1）慢性海洛因给药大鼠海马DOR、MOR在表达降低，CREB蛋白磷酸化增多
　　 （2）MOR特异性抑制剂纳洛酮预处理，部分抑制慢性海洛因给药引起的CREB蛋白磷酸化增加
　　 （3）DOR特异性抑制剂纳曲酮预处理，部分抑制慢性海洛因给药引起的CREB蛋白磷酸化增加
　　 （4）海洛因急性处理HEK293细胞DOR、MOR磷酸化水平增高，CREB磷酸化水平增高，突变的DOR没有任何变化
　　 结论：实验结果显示，大鼠海马DOR与MOR都是海洛因的受体，在海洛因引起的CREB磷酸化增强的信号通路中起了重要的作用。海洛因慢性处理海马DOR与MOR表达降低。海洛因能刺激DOR、MOR引起细胞下游信号分子CREB磷酸化增强。

目录

文摘

英文文摘

英文缩写词表

前 言

材料与方法

实验结果

3.1 DOR与MOR在大鼠海马表达

3.2 慢性海洛因处理大鼠海马DOR、MOR及pCREB的改变

3.3 纳洛酮对慢性海洛因处理大鼠海马区域DOR、MOR、pCREB的影响

3.4 纳曲酮对慢性海洛因处理大鼠海马区域DOR、MOR、pCREB的影响

3.5 急性海洛因处理HEK293细胞对MOR及CREB磷酸化水平的改变

3.6 急性海洛因处理HEK293细胞对DOR及CREB磷酸化水平的改变

3.7 纳洛酮对急性海洛因处理HEK293细胞中MOR、CREB磷酸化水平的影响

3.8 纳曲酮对急性海洛因处理HEK293细胞中DOR、CREB磷酸化水平的影响

3.9 磷酸化对急性海洛因处理细胞内CREB磷酸化水平的影响

讨 论

1 DOR与MOR阿片受体在中枢的表达

2 慢性海洛因处理与海马DOR、MOR及pCREB的相互关系

3 HEK293细胞中过表达DOR与MOR，海洛因急性处理对细胞内CREB磷酸化水平的影响

结 论

参考文献

文献综述

参考文献

致谢