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【6h】

日本血吸虫正常发育雌虫与发育阻遏雌虫差异表达蛋白分析

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目录

摘要

英文缩略表

1.1血吸虫概述

1.1.1血吸虫的分类和生活史

1.1.2血吸虫的生殖生理

1.1.3血吸虫病概况及防治

1.2血吸虫差异蛋白研究方法与进展

1.3 RNA干扰技术研究方法与进展

1.4实验目的与意义

第2章正常发育雌虫与发育阻遏雌虫蛋白质组学分析

2.1引言

2.2实验材料

2.2.1生物材料

2.2.2实验试剂

2.2.3实验仪器

2.3实验方法

2.3.1虫体样品的收集

2.3.2虫体样品的形态学观察

2.3.3蛋白提取

2.3.4 SDS-PAGE检测蛋白表达

2.3.5蛋白酶解

2.3.6肽段标记

2.3.7肽段分离

2.3.8高效液相

2.3.9质谱检测

2.3.10 Mascot搜索

2.3.11蛋白质iTRAQ定量

2.3.12差异表达蛋白的MRM验证

2.3.13生物信息学分析

2.3.14差异表达蛋白亚细胞定位

2.4实验结果

2.4.1正常发育雌虫和发育阻遏雌虫形态学观察

2.4.2 SDS-PAGE电泳

2.4.3酶解肽段浓度测定

2.4.4蛋白质鉴定结果

2.4.5蛋白质iTRAQ定量结果

2.4.6显著性差异蛋白质

2.4.7 MRM结果

2.4.8生物信息学分析

2.5讨论

第3章日本血吸虫差异表达蛋白SjLwr的克隆、表达

3.1引言

3.2实验材料

3.2.1生物材料

3.2.2实验试剂

3.2.3实验仪器

3.3实验方法

3.3.1实验主要试剂的配制

3.3.2样品的收集

3.3.3 SjLwr基因的分子特征分析

3.3.4 Sjtwr基因的克隆

3.3.5重组质粒pET-28(+)-SjLwr的原核表达

3.3.6 rSjLwr重组蛋白的纯化

3.3.7 rSjLwr重组蛋白多克隆抗体的制备

3.3.8表达产物的Western blot检测

3.3.9 SjLwr蛋白在虫体中的定位分析

3.3.10 SjLwr基因在血吸虫中的转录情况

3.4实验结果

3.4.1 SjLwr分子特征分析

3.4.2 SjLwr基因的克隆

3.4.3重组质粒原核表达及蛋白纯化

3.4.4 SjLwr反应原性分析

3.4.5 SjLwr蛋白在虫体中的定位

3.4.6 SjLwr在血吸虫中的转录情况

3.5讨论

第4章RNA干扰SjLwr基因的功能研究

4.2.3实验仪器

4.3实验方法

4.3.1 siRNAs分子设计

4.3.2筛选最佳siRNA

4.3.3体内长期RNA干扰

4.4实验结果

4.4.1筛选最佳siRNA

4.4.2长期干扰对虫体SjLwr转录水平的影响

4.4.3长期干扰对虫体产卵及虫卵孵化的影响

4.4.4长期干扰对虫体体被结构的影响

4.4.5长期干扰对虫体生殖细胞的影响

4.5讨论

第5章总结

参考文献

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

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