PTEN与VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及相互作用

摘要

第一部分PTEN与VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义 一PTEN在原发性肝细胞癌中表达及其意义 目的：检测第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)蛋白及mRNA在肝细胞癌和癌旁组织中的表达，并分析和探讨PTEN表达情况与HCC发生、发展、侵袭性及转移的关系和临床意义。 方法：利用免疫组织化学链霉素亲合素—生物素—过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例肝细胞癌及癌旁组织中PTENmRNA及蛋白表达，并进一步比较分析PTENmRNA及蛋白表达在二者中的差异。 结论：PTEN蛋白及mRNA在肝细胞癌组织中的表达阳性强度明显低于癌旁组织中，并与肝细胞癌组织分化程度和侵袭性呈负相关。因此我们推断PTEN基因表达率的高低可能与肝细胞癌的发生及预后均有关，PTEN表达水平一定程度上能反映肝细胞癌组织分化和侵袭性强弱，PTEN表达缺失提示肝细胞癌患者预后较差。 二VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义 目的：检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA在肝细胞癌和癌旁组织中的表达，并分析和探讨VEGF表达情况与HCC发生、发展、侵袭性及转移的关系和临床意义。 方法：利用免疫组织化学链霉素亲合素—生物素-过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例肝细胞癌及癌旁组织中VEGFmRNA及蛋白表达，并进一步比较分析VEGFmRNA及蛋白表达在二者中差异。 结论：1、VEGFmRNA及蛋白在肝细胞癌组织中阳性表达不仅明显高于癌旁肝组织，而且随癌组织侵袭性及患者临床恶性进展程度增加而增强，这可能是由于HCC进展过程中，需要大量新生血管为其提供氧和营养物质，因而，肿瘤侵袭性强、临床恶性程度高者，VEGF转录、翻译表达均增加，VEGF表达水平一定程度上能反映肝细胞癌组织分化和侵袭性强弱，肝细胞癌组织分化程度、侵袭性与VEGF表达呈正相关。2、本研究观察到，VEGF主要在HCC细胞表达，而血管内皮细胞仅个别弱表达，从而推测，VEGF可以通过自分泌机制作用于自身肿瘤细胞，也可能以旁分泌途径作用于血管内皮细胞，具体机制有待进一步实验证实。 三PTEN、VEGF和MVD在原发性肝细胞癌中相关性及其与临床病理特征的关系 目的：肝细胞癌是富含血管的实体瘤，血管生成在其发生、发展和侵袭、转移中起着重要的作用。本课题的前期实验提示观察PTEN与VEGF表达与肝细胞癌的发生、发展和侵袭、转移起一定的作用，其水平一定程度上能反映肝细胞癌组织分化和侵袭性强弱，本实验观察PTEN与VEGF在肝细胞癌中表达的相关性和肝细胞癌血管形成的关系。 方法：采用免疫组织化学链霉素亲合素—生物素—过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例HCC及癌旁组织中PTEN与VEGF蛋白及mRNA表达和微血管密度。 结论：1、PTEN和VEGF蛋白表达呈负相关性，从而表明VEGF异常激活可能与PTEN基因表达缺失有密切关系。在肝细胞癌中PTEN可能具有负向调节VEGFmRNA及其蛋白表达作用，这在临床上有一定意义，即可根据PTEN蛋白阳性表达情况估计HCC患者病程是否进展及有无肝内转移，初步估计预后。 2、肝细胞癌组织中VEGF蛋白表达与MVD呈正相关而与PTEN蛋白表达呈负相关，MVD在肿瘤边缘部分分布最多，而且肝癌组织高侵袭区域通常位于其前沿，即周边区域，该区域癌细胞分泌VEGF等细胞因子较多，新生血管数目较丰富，更易肿瘤细胞脱离原发灶进入血管，发生侵袭和转移，提示VEGF对新生血管形成起重要作用，而高表达MVD肝癌组织较低MVD值者更易复发和转移、预后更差。 第二部分PTEN质粒转染肝癌细胞对VEGF的作用及意义 目的：研究PTEN质粒转染肝癌细胞HepG2细胞后，肿瘤细胞的生物学特性的变化及肿瘤细胞内VEGF的表达. 方法：将携有PTEN基因的真核表达载体转染HepG2细胞，应用RT-PCR、ELISA法检测转染的肝癌细胞内PTEN、VEGF在mRNA水平的表达；应用免疫组化技术、WestenBlot等技术检测转染后肝癌细胞中PTEN、VEGF的蛋白表达；并检测转染后的细胞活力和绘制细胞生长曲线，反应PTEN过表达对肝癌细胞生物学行为的影响。 结论：PTEN在肝癌细胞中的过表达能够有效地抑制肝癌细胞的增殖，并下调VEGF的表达，从而减少由VEGF介导的肿瘤血管形成。 第三部分VEGF反义寡核苷酸转染肝癌细胞后PTEN的变化及意义 目的：研究VEGF反义寡核苷酸转染肝癌细胞后，对肿瘤细胞增殖的影响和PTEN表达的变化。 方法：将人工合成VEGF反义寡核苷酸转染肝癌细胞hepG2后，应用流式细胞技术检测转染效率以及肝癌细胞的凋亡，观察肝癌细胞的生长增殖的变化；同时应用RT-PCR技术检测肝癌细胞中VEGF和PTEN的表达，应用激光共聚焦显微镜观察转染前后HepG2细胞PTEN表达及其形态学的变化。 论：VEGF反义寡核苷酸转染HepG2肝癌细胞后，能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖活性，使肿瘤细胞的凋亡增加。为临床治疗肝细胞癌提供新的途径。

目录

前言

第一部分PTEN与VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义 一PTEN在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

第一部分PTEN与VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义 二VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义

第一部分PTEN与VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及其意义 三PTEN、VEGF和MVD在原发性肝细胞癌中的相关性及其与临床病理特征的关系

第二部分PTEN质粒转染肝癌细胞对VEGF的作用及意义

第三部分VEGF反义寡核苷酸转染肝癌细胞后PTEN的变化及意义

全文总结

综述一肿瘤抑制基因PTEN在肝细胞肝癌中的研究进展

综述二VEGF和PTEN在人类肿瘤中表达相互关系的研究进展

附录

致谢