cADPR在哮喘致敏血清和细胞因子所致鼠支气管平滑肌细胞应激时钙反应增强中的作用

摘要

支气管哮喘（简称哮喘）是一种病因和发病机制都十分复杂的气道慢性炎症性疾病，气道炎症和气道高反应性是它的重要特征。支气管平滑肌细胞作为气道炎症和气道高反应性的主要效应细胞，它的钙浓度变化影响着收缩性，细胞增殖、浸润和细胞因子的释放。Th2 类细胞因子白介素-5（IL-5）、白介素13（IL-13）
　　 以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在哮喘的发生、发展的过程中扮演着重要的角色。
　　 研究表明细胞因子和哮喘致敏血清可调节气道平滑肌细胞的钙反应。环腺苷二磷酸核糖（cADPR），一种重要的钙调节的第二信使，通过细胞内钙释放受体雷尼丁受体（RyR）发挥着作用。FK506 结合蛋白12.6（FKBP12.6）是免疫抑制蛋白超家族的主要受体结合蛋白，具有通过结合RyR2 上的四个结合位点来稳定该受体的作用。
　　 目的：
　　 本项目的研究是研究cADPR在哮喘致敏血清和细胞因子处理导致的鼠支气管平滑肌细胞对刺激剂的钙反应增强中的作用，及其作用是否通过影响FKBP12.6和RyR2的的结合活性。从而探讨cADPR在哮喘发病机制的作用，为临床预防和治疗哮喘提供新的思路和实验依据。
　　 方法：
　　 1．用组织贴块法原代培养鼠支气管平滑肌细胞。
　　 2．用哮喘致敏血清和细胞因子处理鼠支气管平滑肌细胞后，用钙离子荧光指示剂Fura-2 标记后，采用实时钙荧光成像技术动态监测胞浆游离钙浓度（[Ca2+]I）的变化。观察哮喘致敏血清和细胞因子处理后，10μmol/L 缓激肽和10μmol/L 乙酰胆碱分别刺激引起的胞浆内游离钙的动态变化。以及8-Br-cADPR和3-Deaza-cADPR 依次孵育细胞后，10μmol/L 缓激肽刺激引起的胞浆内游离钙的动态变化。
　　 3．用荧光分光光度计来检测哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞中ADP-ribose cyclase的活性变化。
　　 4．免疫荧光染色检测哮喘致敏血清和细胞因子处理对FKBP12.6和RyR2的共定位的影响，以及用cADPR的类似物3-Deaza-cADPR 处理后的共定位变化。
　　 5．用免疫共沉淀法测定哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6和RyR2的结合活性的变化。
　　 结果：
　　 1．细胞的形态与“波峰---波谷”样结构以及平滑肌肌动蛋白α的特异性表达证实所培养细胞为鼠支气管平滑肌细胞。
　　 2.哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞，乙酰胆碱、缓激肽诱发的钙升高的幅度都明显高于它们的对照组。
　　 3．8-Br-cADPR和3-Deaza-cADPR 依次预先作用哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞，缓激肽诱发的钙升高的幅度也都明显高于它们的对照组。
　　 4．哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞，ADP-ribosecyclase的活性也明显高于它们的对照组。
　　 5．细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6和RyR2 共定位明显减少。3-Deaza-cADPR 导致哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6和RyR2 共定位进一步减少。
　　 6．免疫共沉淀法也说明了哮喘致敏血清和细胞因子处理后的鼠支气管平滑肌细胞FKBP12.6和RyR2 结合减少。
　　 结论：
　　 cADPR在哮喘致敏血清和细胞因子处理所致的气道平滑肌细胞应激时钙反应增强中发挥一定的作用，其作用可能与引起FKBP12.6和RyR2的解离有关。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结 果

讨 论

小结

参考文献

综 述cADPR 及细胞因子对哮喘的影响研究进展

致谢