蓝氏贾第虫无义介导的mRNA降解机制研究

目录

第一章 文献综述

1.1无义介导的mRNA降解途径

1.2 NMD途径中的几种底物

1.3 参与NMD途径过程的几种因子

1.3.1 UPF核心因子

1.3.2 SMG因子

1.3.3 RNA结合蛋白HRP1

1.3.4降解酶

1.4 NMD途径模型结构图

1.4.1 EJC模型

1.4.2 伪3’-UTR模型

1.4.3 DSE模型

1.5选材特点及意义

1.5.1选材特点

1.5.2研究意义

第二章 贾第虫中NMD途径因子的信息学分析

2.1引言

2.2方法

2.3实验结果

2.3.1蓝氏贾第虫中参与NMD途径的因子种类及结构

2.3.2蓝氏贾第虫中UPF1的CH结构域分析

2.4讨论

第三章 NMD途径因子间相互作用关系的酵母双杂交实验

3.1引言

3.2实验材料

3.2.1菌株和质粒

3.2.2酶及生化制剂

3.2.3试剂的配制

3.3实验方法

3.3.1引物的设计

3.3.2构建重组质粒

3.3.3酵母双杂交实验确定NMD因子间的相互作用关系

3.4实验结果

3.4.1酵母双杂交实验（YTH）重组质粒的构建

3.4.2上游移码蛋白GlUPF1的不同截短体蛋白与GlHRP1间的作用关系

3.4.3上游移码蛋白GlUPF1的不同截短体蛋白与GlSki7p间的作用关系

3.4.4上游移码蛋白GlUPF1的不同截短体蛋白与GlXRN1(1~500 aa)间的作用关系

3.4.5上游移码蛋白GlUPF1的不同截短体蛋白与GlXRN1(1~500)、GlSki7p和GlHRP1作用强度分析

3.5讨论

第四章体外Pull down实验验证贾第虫中NMD途径因子间的相互作用关系

4.1引言

4.2实验材料

4.2.2酶制剂及实验用品

4.2.3所用试剂的配制方法

4.3实验方法

4.3.1引物的设计

4.3.2重组质粒的构建

4.3.3GST融合蛋白的大量表达与纯化

4.3.4 His融合蛋白的大量表达与纯化

4.3.5体外Pull down实验

4.3.5 Western blot

4.4实验结果

4.4.1原核表达载体的构建

4.4.2重组蛋白的大量表达与亲和纯化

4.4.3Western blot分析蛋白间的相互作用

4.5讨论

总结与展望

总结

展望

参考文献

攻读硕士期间取得的研究成果

致谢

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