引言
1.实验材料
1.1主要的实验试剂
1.2 主要实验仪器
1.3 细胞株与实验动物
1.4 转染所用的RNA序列
1.5 主要实验试剂的配制
1.6 实验分组
1.7 常用软件及数据库
(1)文献检索相关的数据库
(3)基因相关资料查询工具
2.1人肝癌 HepG 2 细胞体外培养
2.1.1 细胞复苏
2.1.2 细胞传代
2.1.3 细胞冻存
2.1.4 细胞计数
2.2肝癌HepG2肿瘤裸鼠模型的建立
2.3 荷瘤裸鼠一般生活状况的观察
2.4 冰冻切片的制备
2.5 HE染色法观察裸鼠肿瘤组织的病理形态
2.6 免疫荧光检测肿瘤组织中P21和MTH1蛋白的表达
2.7 qPCR检测HepG2细胞中p21和MTH 1基因的相对表达量
2.7.1 肿瘤组织总RNA 的提取
2.7.2 RNA 反转录为cDNA
2.7.3 实时荧光定量PCR检测肿瘤组织中p21和MTH1基因的相对表达量
2.8 Western Blotting 方法检测 HepG2 肿瘤组织中P21、MTH 1蛋白的相对表达量
2.8.1 肿瘤组织总蛋白的提取
2.8.2 蛋白免疫印记（WB）实验
2.9 ELISA方法检测肿瘤组织中相关凋亡蛋白Bak、Caspase-3蛋白的相对表达量
2.10 药效实验
2.10.1 肝癌HepG 2 肿瘤裸鼠模型的建立
2.10.2 荷瘤裸鼠一般生活状况的观察
2.11 统计分析
3.实验结果
3.1 荷瘤小鼠一般生理情况观察
3.2 siRNA和saRNA给药对小鼠肿瘤体积、质量和生存率的影响
3.3 HE染色法观察肿瘤组织的细胞形态
3.4 免疫荧光法检测肿瘤组织中P21、MTH 1蛋白的表达
3.5 实时荧光定量PCR检测HepG 2肝癌组织中p21和MTH 1基因mRNA的相对表达量
3.6 Western Blotting和ELISA 检测 HepG2 肝癌组织中P21、MTH 1及相关凋亡蛋白Bak、Caspase-3的相对表达量
3.7 荷瘤小鼠一般生理情况观察
3.8 给药后对小鼠生存率和肿瘤体积、质量的影响
讨论
结论
参考文献
综述
综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢
声明
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