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【6h】

β-catenin的ISG化对酒精性脂肪肝脂质代谢及细胞凋亡的影响及机制研究

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目录

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中英文缩写对照(Abbreviations)

1. 前言

2. 实验材料

2.1 实验动物

2.2 实验细胞

2.3 药品与试剂

2.4 仪器与设备

2.5 溶液和试剂的配制

3. 实验方法

3.1 酒精性脂肪肝模型建立

3.2 肝脏组织HE染色

3.3 肝脏组织油红染色

3.4 酶标仪比色法测定TG含量

3.5 细胞培养

3.5.1 细胞复苏与培养

3.5.2 细胞传代

3.5.3 细胞冻存

3.5.4 细胞转染

3.5.5 细胞凋亡

3.6.1 组织/细胞总蛋白提取

3.6.2 BCA测定总蛋白

3.6.3 Western blot实验用液的配制

3.6.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

3.6.5 转膜(湿转法)

3.6.6 蛋白免疫印迹

3.7.1 组织或细胞总RNA的提取

3.7.2 RNA定量

3.7.3 CDNA的合成

3.8 细胞ROS活性氧检测

3.9 计算机模拟对接

3.10统计学分析

4. 实验结果

4.1.1 酒精性脂肪肝小鼠模型的建立

4.1.2 ISG15、HERC5和β-Catenin在酒精性脂肪肝中的表达

4.2 ISG15、HERC5和β-Catenin在乙醇刺激的L-02、AML-12细胞中的表达

4.2.1 ISG15、HERC5和β-Catenin在AML-12中的表达

4.2.2 ISG15、HERC5和β-Catenin在乙醇刺激的L-02细胞中的表达

4.3β-Catenin稳定结合于ISG B、C和G序列

4.4 HERC5对乙醇刺激的L-02细胞中β-Catenin的调控

4.4.1 体外沉默HERC5降低乙醇刺激的L-02细胞中β-Catenin的ISG化水平

4.4.2 体外沉默HERC5降低乙醇刺激的L-02细胞ROS水平

4.4.3 体外沉默HERC5减轻乙醇刺激的L-02细胞中脂质代谢紊乱

4.4.4 体外沉默HERC5减少乙醇刺激的L-02细胞的凋亡

4.4.5 体外过表达HERC5升高乙醇刺激的L-02细胞中β-Catenin的ISG化水平

4.4.6 体外过表达HERC5升高乙醇刺激的L-02细胞ROS水平

4.4.7 体外过表达 HERC5促进乙醇刺激的L-02细胞中脂质代谢紊乱

4.4.8 体外过表达HERC5促进乙醇刺激的L-02细胞的凋亡

4.5β-Catenin对乙醇刺激L-02细胞脂质代谢及细胞凋亡的机制研究

4.5.1 N-乙酰半胱氨酸(ROS抑制剂)减少酒精引起的脂肪变性指标的异常表达

4.5.2 N-乙酰半胱氨酸(ROS抑制剂)减少酒精引起的肝细胞凋亡

5. 讨论

6. 结论

参考文献

附录

致谢

综述:β-连环蛋白的稳定性调控

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