声明
1引言
2 材料与方法
2.1实验材料
2.1.1主要仪器和试剂
2.1.2 实验动物
2.2 实验分组及方法
2.2.1 SD大鼠心肌纤维化的模型建立
2.2.2 取大鼠心脏标本
2.2.3 石蜡病理切片的制作及染色切片的制作
2.2.4 测定心脏组织CVF(胶原容积分数)
2.2.5 SD乳鼠CFs的提取与培养
2.2.6 重组质粒的提取
2.2.7 瞬时转染 miR-369-5p mimics、miR-369-5p inhibitors、过表达质粒mDNMT3a-pEGFP-C3、DNMT3a siRNA、空载体对照(NC)及空白组
2.2.8 CCK8法检测细胞的增殖活性
2.3统计学处理
3.结果
3.1 AAC术后大鼠模型情况
3.2.1 HE染色结果
3.2.2 Masson染色结果
3.2.3 计算胶原容积分数(CVF)
3.3 SD大鼠心脏标本中miR-369-5p和DNMT3a的表达变化
3.4 Western blot检测模型组大鼠心脏标本中α-SMA、ColⅠ、DNMT3a和PTCH1蛋白表达变化
3.5 心肌成纤维细胞(CFs)的鉴定
3.6.1 qRT-PCR 检测瞬时转染 miR-369-5p mimics 及 inhibitors 对 CFs 中miR-369-5p表达的影响
3.6.2 CFs中瞬时转染miR-369-5p对ColⅠ、α-SMA、DNMT3a、PTCH1的mRNA表达影响
3.6.3 Western blot检测瞬时转染miR-369-5p后CFs中相关蛋白表达的变化
3.7.1 心肌成纤维细胞(CFs)中转染DNMT3a过表达质粒和DNMT3a siRNA后ColⅠ、α-SMA、DNMT3a、PTCH1的mRNA表达变化
3.7.2 Western blot 检测转染DNMT3a 过表达质粒、DNMT3a siRNA 后心肌成纤维细胞(CFs)中相关蛋白表达的变化
3.8.1 CCK8 检测转染miR-369-5p 对CFs 细胞增殖活性的影响
3.8.2 转染DNMT3a过表达质粒、DNMT3a siRNA对CFs细胞增殖活性的影响
4.讨论
5.结论
参考文献
致谢
综述:microRNA与心肌纤维化的研究进展
安徽医科大学;