纺锤体检查点蛋白MAD在上皮性卵巢癌发生中的作用及其机制研究

摘要

背景据美国癌症协会统计数据估计2006年美国卵巢癌患者死亡率仍居女性生殖系统肿瘤首位。卵巢癌高死亡率的部分原因在于2/3以上的卵巢癌患者在初次诊断时已是疾病进展期，缺乏有效的早期诊断策略。卵巢肿瘤有很大的异质性，其中上皮性卵巢肿瘤占多数。随着组织病理学和分子生物学技术的发展，对卵巢肿瘤发生学和自然史的理解有了长足进步，将上皮性卵巢肿瘤的发生学分为两大类：Ⅰ型肿瘤是低分级惰性肿瘤，存在良性－交界性－恶性逐级发生过程，存在前体病变；Ⅱ型肿瘤是发展迅速的高分级侵袭性肿瘤，均直接发展形成，无明显的前体病变。此模型为正确理解卵巢癌这一复杂肿瘤的发生学提供形态学和分子框架，为早期诊断和治疗卵巢癌，改善卵巢癌病人长期生存提供线索。 现代细胞遗传学和分子生物学研究表明，染色体不稳定性(chromosomalinstabilityCIN)是大部分癌症的显著特征，是肿瘤发生发展和肿瘤异质性的发动机。随着CIN分子机制研究的不断进展，其中一些维持染色体稳定的分子遗传变异或异常表达，例如纺锤体检查点蛋白异常表达等，也可能导致肿瘤的发生。所以这些异常改变均有可能成为肿瘤诊断标记和治疗靶点。纺锤体检查点确保染色体的稳定性，它包括MAD(Mitoticarrestdeficiency)和BUB(buddinguninhibitedbybenzimidazole)等成分，其中MAD2是关键成分，它通过监视微管的粘附和感受压力变化两种方式感知染色体的错误分离，其下游作用点细胞周1期蛋白cyclinB1降解是细胞分裂中期进行至后期直至退出有丝分裂的必要条件。 近年来已在酵母和哺乳动物细胞的研究中证实MAD2在纺锤体检查点功能中的重要性，与CIN的发生密切相关，但是MAD2的异常与人类肿瘤发生的关系仍不十分清楚。在对多种肿瘤细胞进行的研究中发现MAD2稳定状态的缺陷可能启动了CIN和肿瘤的发生。虽然上皮性卵巢癌发生的分子机制相对不明确，但是卵巢癌中CIN的发生率很高是值得我们关注的事件，CIN在卵巢癌的发生和发展过程中起了重要作用。而对卵巢癌的纺锤体检查点包括MAD2的研究停留在体外阶段，且主要研究其在耐药方面的机理，缺乏卵巢癌实体组织MAD2的表达与肿瘤关系的体内研究依据。所以本研究对MAD2在上皮性卵巢癌发生中的作用及其机制进行研究。 方法与结果第一部分纺锤体检查点蛋白MAD2在浆液性卵巢肿瘤中的表达及意义方法：采用免疫组化和免疫印迹(westernblot)法对19例正常卵巢、17例卵巢浆液性囊腺瘤、21例卵巢交界性浆液性囊腺瘤和40例卵巢浆液性囊腺癌组织中MAD2蛋白的分布与表达变化进行检测。 结果：(1)MAD2蛋白定位在各类型组织上皮细胞胞核和胞浆；各类型组织均有MAD2蛋白的表达，但表达强度不同：交界性和恶性浆液性卵巢肿瘤中MAD2的表达明显高于良性浆液性卵巢肿瘤和正常卵巢组织(P＜0.05)，交界性和恶性浆液性卵巢肿瘤之间、良性浆液性卵巢肿瘤和正常卵巢组织之间MAD2的表达无显著性差异(P＞0.05)。(2)恶性浆液性卵巢肿瘤不同临床分期(Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期)、病理分级(G1和G2-3)、腹水(＜500ml和＞500ml)、血清CA125值(正常和增高)及有无盆腹腔转移间MAD2蛋白表达进行比较，差异无显著性(P＞0.05)。 第二部分上皮性卵巢癌组织MAD2的表达及其作用机制研究2方法：采用免疫印迹(westernblot)法对42例上皮性卵巢癌恶性组织(20例浆液性、7例粘液性、8例子宫内膜样、7例透明细胞)和其相邻或对侧非恶性组织进行MAD2和cyclinB1蛋白表达的检测，采用流式细胞术对恶性组织的细胞周期分布和DNA倍体进行检测。 结果：与相对应的非恶性组织比较，76％(32/42)上皮性卵巢癌组织中MAD2蛋白表达水平上调，与cyclinB1的表达增强、非整倍体的出现均存在相关性(P＜0.05)，而与细胞周期中G2/M的百分率增高无显著性关系(P＞0.05)。 结论一、纺锤体检查点蛋白MAD2的异常表达参与上皮性卵巢肿瘤的发生，在交界性和恶性浆液性卵巢肿瘤组织中表达差异无统计学意义，不同临床病理特征的恶性浆液性卵巢肿瘤组织中MAD2表达差异无统计学意义，提示MAD2异常表达可能是卵巢肿瘤发生过程中的早期事件。 二、在上皮性卵巢癌组织中MAD2蛋白异常表达可能存在MAD2-cyclinB1-CIN通路，但在不同组织类型的上皮性卵巢癌中可能存在其它通路。

目录

前 言

第一部分 纺锤体检查点蛋白MAD2在浆液性卵巢肿瘤中的表达及意义

第二部分 上皮性卵巢癌组织MAD2的表达及其作用机制研究

讨论

结论

参考文献

浆液性卵巢癌发生学及其遗传学机制研究进展

致 谢