大鼠糖尿病肾脏病理改变以及罗格列酮对其病理改善的研究

摘要

据统计我国糖尿病患病率已超过总人口的2.5％。糖尿病肾病(DN)是糖尿病最严重的微血管并发症之一,糖尿病肾病引发的终末期肾功能衰竭(ESRD)正在成为威胁糖尿病患者生命的主要原因。据美国2000年统计,每年新增ESRD患者中由DN引发的已近50%。近几年我国经济较发达地区统计资料也发现DN所致ESRD的比例达15%左右。因此有效控制DN的进展是当前临床治疗学上重要课题。DN病理特征主要包括肾小球基底膜增厚和系膜区细胞外基质沉积(extracellular matrix,ECM)。罗格列酮作为胰岛素增敏剂,通过结合并激动过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated recptors,PPARs),其中主要是通过激活过氧化物酶体增生物激活受体gamma(peroxisome proliferator activated receptorsgamma:PPARgamma),在降血糖、调节脂质代谢,抗炎,抑制细胞生长因子、降血压、降低尿白蛋白方面起到重要作用。过氧化物酶体增生物激活受体gamma(peroxisomeproliferator activated receptors gamma:PPARgamma)是新近发现的血管病理改变的靶目标物质,它通过调节基因表达对细胞外刺激作出应答。
　　研究目的1.分析糖尿病大鼠肾脏病理形态改变情况。2.了解罗格列酮对糖尿病大鼠肾脏病理形态的影响。
　　实验材料和方法一.建立糖尿病动物模型1.购置30只10周龄Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,平均体重315±30.06g,平均血糖96±4.86 mg/L。2.全部SD大鼠在清洁级条件下饲养,室内温度为15～25℃,12小时光亮,12小时黑暗,食物与饮水能自由得到。3.糖尿病模型建立后第2天起,其中的10只大鼠用PPARgamm配体代表物:罗格列酮(rosiglitazone R)1mg/kg/day生理盐水溶解后灌胃。糖尿病大鼠每天测尿糖一次,每周测血糖一次,使糖尿病大鼠模型的血糖在250～500 mg/L之间。4.大鼠处理:模型建立后10周,大鼠以氯胺酮针35mg/kg和苯巴比妥针50mg/kg腹腔内注射麻醉,用快速法血糖测定仪(美国罗氏公司Adantage)测血糖。5.统计学处理:数据用平均值X±标准差S表示,采用多组方差分析SPSS11.5 forwindows One-Way ANOVA统计。6.取正常大鼠组、糖尿病大鼠组、糖尿病罗格列酮组的肾脏组织分别制作光镜标本。二.光镜标本制作(1)取材;(2)固定;(3)脱水:升梯度酒精脱水;(4)透明:用二甲苯、观察组织块至透明为止;(5)浸蜡:一般用两个蜡缸;(6)包埋;(7)切片和贴片;(8)HE染色步骤:1)二甲苯5～10分钟,脱去切片中的石蜡。2)降浓度梯度酒精脱水。100%→95%→90%→80%→70%),每级脱水2～3分钟以除二甲苯。3)蒸馏水洗,去乙醇10～30分钟。4)苏木精,染细胞核,2～3分钟。5)0.5%盐酸酒精分化数秒。6)流水冲洗,30～40分钟。7)置入伊红2～3分钟,细胞染成粉红色。8)洗,去浮色,数秒。9)梯度酒精脱水,每级3～5分钟。10)二甲苯10分钟,使标本透明。11)封固。三、光镜下观察、拍照.四、数据分析所有样本的数据进行均数和标准差计算,SPSS11.5数据分析软件进行统计分析(One-Way ANOVA)。P<0.05有显著性差异,P<0.01为有高度显著性差异。结果1.大鼠体重:用链酶佐菌素(STZ)诱导建立的糖尿病大鼠体重和对照组相比,体重明显减轻P<0.01。罗格列酮治疗的糖尿病大鼠血糖仍很高,体重无明显降低。2.大鼠血糖浓度:用STZ诱导的糖尿病大鼠的血糖显著高于正常对照组P<0.01。糖尿病大鼠用罗格列酮治疗组的血糖浓度与未用罗格列酮治疗的糖尿病大鼠无显著差异,P>0.05。3.糖尿病大鼠肾脏组织结构,所有标本在光学显微镜下放大40倍、400倍观察:正常对照(C组)肾小球毛细血管腔均匀一致,无狭窄,肾小管—肾间质无炎症细胞浸润;糖尿病(D组)形态学改变明显,大鼠肾小球毛细血管袢塌陷,管腔闭塞,系膜区增宽,基膜增厚和系膜基质增多,肾小球体积增大,细胞数量增多,出现玻璃样变;肾小管肿胀、变性、空泡形成,肾间质可见淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润。罗格列酮治疗组(DR组)病变较轻,可见肾小球毛细血管管腔轻度狭窄,肾小管—间质见少量淋巴细胞浸润。
　　结论：糖尿病大鼠肾脏形态学破坏明显,罗格列酮治疗后肾小球和肾小管—肾间质病变程度均较糖尿病组明显减轻,罗格列酮对糖尿病肾脏损害有保护作用。

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

致谢

综述一

参考文献

综述二

参考文献