NapsinA、TTF-1、alpha-B-crystallin在原发性肺腺癌中的表达研究

摘要

肺癌发病率在全球各种实体瘤中排名第一，亦居癌症相关死亡的首位，特别是原发性肺腺癌，近年来患病数和比例均呈明显上升趋势，其侵袭性强、预后差，成为人们关注的焦点。原发性肺腺癌早期一般没有明显临床症状，往往在胸部放射学检查偶尔发现，较早就可有血行或淋巴转移，对放、化疗低度敏感，手术治疗仍然是最主要的治疗手段。研究发现原发性肺腺癌多起源于Ⅱ型肺泡上皮和支气管无纤毛分泌细胞（即Clara细胞）。Ⅱ型肺泡上皮细胞功能复杂，除了分泌表面活性物质，Ⅳ型胶原（基底膜成分）和一些重要的酶类物质外，还具有分裂增殖的能力。
　　甲状腺转录因子（Thyroid transcription factor, TTF）有两个亚型:TTF-1和TTF-2，TTF-1是一种分子量为40kD的核蛋白，是NKx2转录基因家族的成员之一，Northern blot在动物胚胎模型中发现胚胎第5天时原始头区同源结构区中出现TTF-1的表达，同期分离出甲状腺球蛋白转录基因蛋白。之后的研究发现，TTF-1在原发性肺腺癌中的表达具有较高敏感性和特异性，提示TTF-1可作为一种有价值的标记用于原发和转移性肺腺癌的鉴别;它对于肺原发性低分化腺癌和鳞癌的鉴别也有一定价值。TTF-1在非小细胞肺癌中阳性表达强度可以作为一个独立的预后指标。
　　Napsin A是天门冬氨酸蛋白酶中的新成员，其活性中心内普遍存在两分子天门冬氨酸。研究[2,11-13]发现Napsin A参加了疏水性SP(SP-B，SP-C)前体的蛋白水解过程，起到诱导蛋白前体成熟，维持肺的形态和正常功能的作用。大量资料表明[2-4,14-16]，这种新的天门冬氨酸蛋白酶NapsinA可在异型增生的Ⅱ型肺泡上皮和原发性肺腺癌中特异性表达，其表达程度并与原发性肺癌的分化程度呈正相关。Napsin A作为一个新的抗体，是判断肿瘤来源和性质提供了有价值和极为特异的肿瘤标志。
　　Alpha B-crystallin是小分子热休克蛋白家族中的一员，被视为是“分子伴侣”和大的可溶体的稳定蛋白。Alpha B-crystallin可以在很多组织和器官中表达，如晶状体、骨骼肌和心肌，可防止由各种因素引起的凋亡，包括过氧化氢和肿瘤凋亡因子。它被认为是在肿瘤的侵袭和转移过程中控制细胞周期、凋亡、坏死和细胞结构重建的重要因素。近来研究发现Alpha B-crystallin在多种肿瘤中高表达，如在结直肠癌、口腔鳞癌、乳腺基底细胞样癌、肾癌、神经胶质瘤以及甲状腺癌中的表达均高于正常对照组。在乳腺癌中，Alpha B-crystallin的过表达被明确认为是细胞培养中的致瘤因素，临床研究中还被发现与淋巴结转移和差预后有关。但在肺腺癌中，Alpha B-crystallin的表达情况以及其与肺腺癌的发生、发展关系的研究比较少见。
　　目的：
　　本研究通过免组组化方法检测肺腺癌中的Alpha B-crystallin的表达情况及其与临床病理特征之间的关系，分析其在肺腺癌发生、发展以及浸润转移过程中的作用及可能的机制，以便为肺腺癌的治疗提供新的靶点。
　　方法:
　　本研究采用回顾性研究方法收集了浙江省绍兴市人民医院2007年至2012年肺腺癌手术标本共82例。所有病例术前均未接受放疗和化疗，且获得较为完整的临床资料，并获得为期1个月至5年的随访。另选取20例肺鳞状细胞癌，24例肺小细胞癌，3例肺混合性癌（大细胞癌+小细胞癌，腺鳞癌，鳞状细胞癌+小细胞癌），2例乳腺浸润性导管癌，2例甲状腺乳头状癌，2例卵巢浆液性乳头状癌，1例胃癌和1例直肠癌作为对照。所有手术切除标本均经4％中性缓冲甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，HE染色后光镜下进行形态学观察，应用免疫组化EnVision法检测Napsin A、TTF-1和Alpha B-crystallin在82例肺腺癌和其他55例恶性肿瘤中的表达情况。采用SPSS17.0软件分析系统，计数资料用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果:
　　NapsinA在82例原发性肺腺癌的表达阳性率为91.46％，NapsinA的表达与年龄、性别、解剖部位、组织学分型(P＞0.05)没有相关性，而与肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移、病理分期、预后(P＜0.05)密切相关。TTF-1在82例原发性肺腺癌的阳性表达率是84.15％，且其表达与年龄、性别、解剖部位、组织学分型、淋巴结转移(P＞0.05)没有相关性，而与肿瘤大小、组织分化程度、病理分期、预后(P＜0.05)密切相关。Alpha B-crystallin在82例肺腺癌中核浆阳性表达率为17.1％，其表达与肿瘤大小、病理分期、预后(P＜0.05)相关。NapsinA、TTF-1、Alpha B-crystallin在不同组织学类型的原发性肺腺癌中的表达可看到，NapsinA和TTF-1在原位腺癌及微浸润性腺癌中均为100％阳性表达。
　　结论:
　　1、 NapsinA和TTF-1在肺癌中表达的阳性率为91.46％和84.15％，在肺腺癌诊断中具有重要的实用价值，故在肺腺上皮肿瘤的病理诊断中，应进行一组包括NapsinA和TTF-1抗体组合的免疫组化检查，以提高肺腺癌的诊断准确性。
　　2、Alpha B-crystallin在82例肺腺癌中核浆阳性表达率为17.1％，其表达与肿瘤大小、病理分期、预后(P＜0.05)相关。Alpha B-crystallin是肺腺癌一个重要预后标志物。

目录

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致谢

摘要

英文缩略词表

1．引言

2．主要的仪器设备和试剂

2．1 仪器设备

2．2 试剂

3．材料与方法

3．1 研究样本

3．2 肺腺癌分类

3．3 HE染色及IHC染色方法

3．4 免疫组化结果判断

3．5 统计学分析

4．结果

5．讨论

6．结论

参考文献

综述

作者简历及在学期间所发表的文章