癌旁组织标志物用于早期诊断前列腺癌的初步研究

摘要

目的：获取前列腺癌组织、癌旁组织及正常前列腺组织标本并验证其病理学类型。分离纯化经过原代培养后的各细胞株分别获得前列腺癌管腔上皮细胞、癌旁组织管腔上皮细胞、癌旁组织基底细胞、良性前列腺组织管腔上皮细胞及良性前列腺基底上皮细胞等5种细胞亚群。对比分析癌旁组织、良性前列腺组织及前列腺癌组织管腔上皮细胞的基因表达谱，同时对比分析癌旁组织和良性前列腺组织基底上皮细胞的基因表达谱，初步探索在癌旁组织中是否可能存在能够应用于前列腺癌临床诊断的特异性标记物，为临床早期诊断前列腺癌及制定后续诊疗计划提供一个新的思路。
　　方法：直接从前列腺癌根治术及膀胱前列腺切除术获取相应的前列腺组织标本。对来源于前列腺癌根治术的组织标本由经验丰富的病理科医师分离其中的恶性癌组织及良性癌旁组织。对最终得到的前列腺癌组织、癌旁组织及来源于膀胱前列腺切除术的正常前列腺组织分别进行HE染色及AMACR和34βE12抗体的免疫组化染色以确定所获得的组织标本的可靠性。
　　对获取的新鲜前列腺组织在4h以内进行洗涤，剪碎，之后加入一型胶原酶混合消化液消化处理18h并对未完全消化的残渣使用胰蛋白酶处理约15min；将消化后得到的细胞接种到75cm2细胞培养瓶中并使用含10%FBS的DMEM/F12培养基进行原代前列腺细胞培养，细胞增殖到一定程度后对癌旁组织细胞和良性前列腺组织细胞均同时染色Trop2和CD49f抗体，通过流式细胞分选分别获得此2种细胞株的高纯度基底细（Trop2+CD49fhigh）和管腔上皮细胞（Trop2+CD49flow）亚群。由于前列腺癌组织缺乏基底细胞，对前列腺癌组织细胞染色Trop2抗体，通过流式细胞分选获得其管腔上皮细胞亚群（Trop2+）。对以上五种细胞亚群进行二代转录组测序，分析癌旁组织、正常前列腺组织及前列腺癌组织管腔上皮细胞的基因表达谱，同时分析癌旁组织和正常前列腺组织基底上皮细胞的基因表达谱。
　　结果：（1）所获取的前列腺癌组织HE染色切片在显微镜下可见前列腺腺泡结构紊乱，基底层消失，呈现出间质侵袭性生长的趋势，同时细胞异型性明显，免疫组化提示AMACR+，34βE12-；所获取的前列腺癌旁组织及正常前列腺组织HE染色切片在光镜下无明显区别，腺泡结构规整，基底细胞层存在，未见细胞核异常改变，免疫组化均为AMACR-，34βE12+。（2）由手术室直接获取的新鲜前列腺组织（包括癌、癌旁及正常前列腺组织）先后经过多种消化酶联合作用后基本消化完全，接种72h后可见小片前列腺上皮集落形成，接种后10天左右大多数样品细胞细胞融合达90%以上。使用Trop2和CD49f抗体双染的癌旁和正常前列腺组织细胞在流式细胞分析中的细胞分群情况相似，且Trop2+的细胞群中根据CD49f的表达情况大致可以分为Trop2+CD49fhigh和Trop2+CD49flow两个亚群。经过原代培养后的癌组织细胞进行TROP2抗体的染色后，流式细胞分析可见细胞主要可分为TROP2+和TROP2-两个细胞亚群。流式分选获得的用于转录组测序的各细胞样本通过流式细胞分析测得其目标细胞比例均在85%以上。（3）通过转录组测序及对不同细胞群基因表达谱的分析，我们发现癌旁组织管腔上皮细胞在部分基因的表达水平上与癌组织相似，而且不同于正常前列腺管腔上皮；癌旁组织的基底上皮细胞在部分基因的表达上与正常前列腺基底细胞也存在不同的基因表达谱。
　　结论：前列腺癌旁组织管腔上皮细胞在部分基因的表达水平上与前列腺癌相似而且不同于正常前列腺管腔上皮细胞，前列腺癌旁组织基底细胞和正常前列腺组织基底细胞也存在完全不同的基因表达谱，其中的差异表达基因如PSG5、RNA5-8S5等基因都可能成为潜在的能够将癌旁组织与正常前列腺组织区分开来的特异性标志物，而差异表达基因中富集程度较高的与癌症相关的信号通路也很有可能在癌症发病早期即发挥着重要的作用。

目录

声明

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、不同类型前列腺组织的病理鉴定及原代培养

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、癌旁组织有别于正常前列腺组织的基因表达

2.1对象和方法

2.2实验结果

2.3讨论

2.4小结

全文结论

论文创新点

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:前列腺癌诊断标志物的研究进展

致谢

个人简历