量子点生物传感膜快速同步定量检测肿瘤标志物的研究

摘要

恶性肿瘤是目前乃至未来病死率较高的病种之一，据世界卫生组织发布的《2014世界癌症报告》显示，2012年全球有820万人死于癌症。对肿瘤标志物的检测有利于实现癌症的早期诊断，从而提高治疗效率，降低死亡率。肿瘤标志物的检测方法多种多样，以免疫层析法最为受到关注。免疫层析技术因其简便、经济、低样品量、无需专业人员操作、可实现床旁快速检测等特点而迅速发展。但以胶体金为代表的免疫层析试纸条灵敏度不高，进行多组分分析时需要多个检测带，且以定性检测为主，无法满足对多种肿瘤标志物的早期同步定量检测需求。
　　免疫层析法所采用的标记材料对免疫传感器的性能起决定性的作用。荧光量子点（QDs）具有荧光强度高、光化学稳定性好、吸收光谱连续、发射光谱窄而对等特性，可实现“一元激发，多元发射”。基于QDs的优势，针对目前免疫层析产品的不足，我们提出以多色QDs作荧光标记物，开发一种基于多色QDs标记的生物传感膜，以实现对多种肿瘤标志物的快速、同步、定量检测。
　　本文以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为偶联剂，制备546nm CdSe/ZnS QDs-抗甲胎蛋白单抗（QDs546-anti-AFP McAb）和620nm CdSe/ZnS QDs-抗癌胚抗原单抗(QDs620-anti-CEA McAb)偶联物。将两种偶联物按一定比例混合喷涂于结合垫上，鼠源甲胎蛋白单抗（anti-AFP McAb）和鼠源癌胚抗原单抗（anti-CEA McAb）混合物以及羊抗鼠IgG分别包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上作为检测带（T带）和质控带（C带），在此基础上制作多色QDs生物传感膜。通过荧光阅读仪检测传感膜上T带和C带的荧光强度，计算出T带和C带的比值（T/C），对应相应的样品浓度绘制出标准曲线，即可达到定量检测的目的。在最优实验条件下，本课题组所开发的多色QDs生物传感膜对AFP和CEA的检测限分别为2 ng∕ml和1 ng∕ml，且无明显交叉反应，灵敏度、特异性高，样品恢复率好，批内稳定性好，批间差异小。
　　本文将多色 QDs与免疫层析技术相结合开发出的生物传感膜，NC膜上只需一条T带和一条C带便可实现对多种肿瘤标志物同步定量检测。其使用方便简单，无需专业人员操作，可在社区、家庭使用，并有利于将来检测仪器的小型化和智能化。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

缩略词表

目录

第一章 绪 论

1.1 肿瘤标志物

1.2 免疫层析技术

1.3 研究内容和创新点

第二章 量子点-抗体偶联物的制备与鉴定

2.1 实验器材

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 量子点生物传感膜定量检测AFP的研究

3.1 实验器材

3.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

第四章 多色量子点生物传感膜同步定量检测AFP和CEA的研究

4.1 实验器材

4.2 实验方法

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

第五章 总结与展望

5.1 全文总结

5.2 展望

致谢

参考文献

攻读硕士期间的研究成果