光纤传感结合微顺序注射-阀上实验室光谱法测定大鼠肠灌流液中H2S含量

摘要

目的：硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）是一种有刺激性气味并污染环境的有毒气体。但近年来研究表明，H2S是继NO和CO之后的第三种气体信号分子，能够自由的通过细胞膜，是一种神经调质，在哺乳动物体组织内和细胞内起到了许多的生理和病理作用，因此，受到科学界广泛关注。本研究旨在探索建立在线、灵敏、快速测定大鼠肠灌流液中H2S的定量分析方法，为有效地测定哺乳动物体内H2S含量提供参考依据和实施案例。
　　方法：采用Na2S作为H2S供体，将光纤传感技术与微顺序注射-阀上实验室（Micro Sequential Injection lab-on-valve，μSIA-LOV）相结合，在进样体积为50μL的条件下分别采用钙黄绿素-铜（Ⅱ）体系荧光恢复法、荧光素汞荧光猝灭法和亚甲蓝法测定大鼠肠灌流液中H2S含量，并对试剂浓度、试剂用量、反应pH值、反应时间、产物稳定性和检测流速等分析条件进行探索和优化。
　　结果：（1）钙黄绿素-铜（Ⅱ）体系荧光恢复法：以200μL pH=8.0的磷酸盐缓冲液为载液，1.0×10-5 mol/L钙黄绿素50μL，1.0×10-5 mol/L硫酸铜50μL；测定大鼠肠灌流液中H2S的线性范围为1.0×10-5mol/L~6.0×10-5mol/L，进样体积50μL，检测流速30μL/s，精密度为3.3％，检测限为5.4×10-6 mol/L，供试品中H2S含量为4.1×10-5mol/L，平均回收率为91.1%，分析频率为40样/h。（2）荧光素汞荧光猝灭法：以100μL0.1mol/L NaOH溶液为载液，1.0×10-5 mol/L荧光素汞50μL，进样体积50μL，检测流速25μL/s，测定大鼠肠灌流液中H2S线性范围为5.0×10-6~1.0×10-4 mol/L，精密度为3.8%，检出限为4.1×10-7 mol/L，供试品中H2S含量为6.6×10-5mol/L，平均回收率为98.2%，分析频率45样/h。（3）亚甲蓝法：在酸性条件下，以100μL水为载液，0.05mol/L醋酸锌50μL，1.0×10-3 mol/L N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐50μL，0.1 mol/L的氯化铁50μL，反应生成亚甲蓝在663.49nm处测定吸光度，进样体积50μL，检测流速5μL/s，测定大鼠肠灌流液中H2S的线性范围为2.0×10-5~4.0×10-4 mol/L，精密度为1.9%，检出限为4.7×10-6 mol/L，供试品中H2S含量为1.62×10-4mol/L，平均回收率为101.7%，分析频率20样/h。
　　结论：将光纤传感技术与微顺序注射技术相结合，利用两者的特点和优势，采用荧光分析技术和亚甲蓝法，能够快速、准确地测定大鼠肠灌流液中H2S的含量，达到了预期目的。不仅为光纤传感与微顺序注射技术的结合应用提供了技术参考，也为生物样品中H2S的在线、灵敏、快速分析方法的建立奠定了基础。

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1 绪论

1.1 硫化氢及硫循环

1.2 内源性H2S

1.3 H2S的测定方法

1.4 光纤传感技术

1.5 微顺序注射-阀上实验室

1.6 仪器组建及程序命令

1.7 选题依据与研究内容

2 钙黄绿素荧光恢复法测定肠灌流液中的H2S

2.1 引言

2.2 仪器、药品试剂

2.3 溶液配制

2.4 方法与结果

2.5 方法学研究

2.6 小结

3 荧光素汞荧光猝灭法测定肠灌流液中H2S

3.1 引言

3.2 仪器、药品试剂

3.3 溶液配制

3.4 方法与结果

3.5 方法学研究

3.6 小结

4 亚甲蓝-分光光度法测定肠灌流液中H2S

4.1 引言

4.2 仪器、药品试剂

4.3 溶液配制

4.4 结果与讨论

4.5 方法学探究

4.6 小结

结论与展望

附录

参考文献

在读期间发表的学术论文

后记