砂梨过敏原蛋白基因的克隆及其对外源赤霉素处理的表达响应

摘要

在以往的研究中过敏原蛋白基因以其致敏性著称，但转录组学分析发现过敏原蛋白基因的表达量发生明显变化，为了探究该基因与果实膨大的关系以及响应赤霉素调控的机制，本文以砂梨品种‘翠冠’[Pyrus pyrifolia(Burm.f.)Nakai]为试材，在盛花期后30天对果柄进行赤霉素涂抹处理，利用RACE和同源序列比对方法克隆得到906bp的目的基因，命名为Ppmal，GenBank登录号KP008110，该基因含有480bp开放阅读框（ORF），预测其蛋白质相对分子量为17.56kD，编码氨基酸159个，等电点为5.62。
　　Ppmal与其他六个物种的过敏原蛋白基因的核苷酸序列同源性达到75％以上，与苹果和西洋梨编码的氨基酸序列同源性分别高达97.48%和96.23%，进化树分析表明Ppmal与苹果Mal的进化关系最近。生物信息学分析获得Ppmal的二级结构，并发现其编码的蛋白质属于病程相关蛋白第十家族，有该家族典型的结构域，有信号肽，亲水性，没有跨膜结构域，亚细胞定位分析发现其位于微体和细胞质中。
　　通过实时荧光定量技术和半定量技术并结合生理数据和透射电镜影像分析该基因在梨不同组织以及梨果实发育过程中的表达变化。结果显示在赤霉素的影响下该基因的表达量随着果实的生长发育呈现先降低后升高的趋势，并且具有组织差异表达的特点，其表达量在成叶中最大，其次是嫩叶，再次是花，枝条最低。综上，我们认为 Ppmal的表达受到赤霉素的调控，并极有可能与砂梨果实的膨大有关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

第一章 文献综述

1.1梨概述

1.2赤霉素增大梨果实库强的研究现状

1.3过敏原蛋白基因的研究进展

1.4本研究的内容、意义及技术路线

第二章 梨过敏原蛋白基因(Ppmal)的克隆及生物信息学分析

2.1引言

2.2试验材料

2.3试验方法

2.4结果与分析

2.5讨论

2.6本章小结

第三章 赤霉素处理对砂梨不同发育阶段Ppmal表达的影响

3.1引言

3.2试验材料

3.3试验方法

3.4结果与分析

3.5讨论

3.6小结

第四章 总结与创新点

4.1总结

4.2实验创新点

4.3展望

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间已发表或录用的论文