家兔延髓腹侧呼吸组中段疑核内P2X受体在机体低氧呼吸反应中的作用

摘要

目的：(1)观察向家兔NA内微量注射P2X受体内源激动剂ATP，P2X受体拮抗剂PPADS(pyridoxal-5'-phosphate-6'-azopheny1-2'，4'-disulphonic acid)对常氧呼吸和低氧呼吸反应的影响，探讨P2X受体在低氧呼吸反应中的作用；(2)进一步应用免疫组织化学的方法，观察P2X受体在NA内表达的数量变化，探索P2X受体在介导低氧呼吸中的作用及其可能的机制。 方法： 1.电生理学实验：实验在麻醉、肌松、人工通气的成年家兔上进行。常氧通气为医用空气(20％O2-80％N2)，低氧通气为10％O2-90％N2混合气体。以膈神经放电为呼吸观察指标。实验在56只健康成年家兔上进行，通过解剖定位和引导呼吸神经元放电定位NA。微量注射：向NA内微量注射P2X受体内源激动剂ATP，观察注射前后，常氧和低氧通气对膈神经放电以及动脉血pH值的变化；为了检验向NA内注射ATP引起的呼吸效应是否呈现剂量依赖性，向NA内注射4个剂量的ATP(0.1，0.3，0.5，0.7μl)。每次注射之间至少间隔l小时；向NA内微量注射广谱P2X受体拮抗剂PPADS(吡多醛衍生物)，5分钟后在同一位点注射ATP0.3μl，观察注射前后常氧和低氧通气对膈神经放电的影响。 2.免疫组织化学实验：健康成年家兔32只，随机分为4组：A组(n=8)：注射生理盐水；B组(n=8)：注射ATP；C组(n=8)：注射PPADS；D组(n=8)：不注射。A、B、C组动物急性缺氧后快速处死，D组动物直接处死，迅速取出脑干，以1096福尔马林PBS溶液浸泡固定脑组织。石蜡包埋后进行切片。采用免疫组织化学方法SP法观察P2X受体在NA内的表达情况。 结果： 1.电生理学实验结果：低氧通气开始后，动物膈神经放电幅度和呼吸频率迅速增加，在低氧通气2分钟左右时达到高峰，随后有逐渐衰减的趋势，但在整个5分钟的低氧通气过程中，始终高于常氧通气状态下的放电幅度和呼吸频率；向NA内微量注射ATP对常氧通气下的膈神经放电没有明显影响，但能显著性增强膈神经放电对低氧呼吸的反应以及降低动脉血pH值；4种剂量的ATP在NA内引起的呼吸兴奋效应呈现显著的剂量依赖性，微量注射大剂量ATP对膈神经放电的兴奋效应明显大于小剂量ATP；向NA内微量注射PPADS对常氧通气下的膈神经放电没有明显影响但削弱ATP引起的低氧呼吸反应。 2.免疫组织化学实验：(1)各组均在NA处观察到P2X受体的表达。(2)统计分析显示低氧通气组动物P2X受体数目比常氧组显著增多，即A、B、C三组P2X受体数目比D组表达明显增加(P<0.01)。 结论：在常氧通气即生理状态下，脑干NA的P2X受体在呼吸调控中无明显作用，但均参与了低氧呼吸反应的形成，增强低氧呼吸反应，而P2X受体阻断剂PPADS削弱ATP引起的低氧呼吸反应效应。 在免疫组织化学实验中发现，P2X受体在家兔NA中有表达，且在低氧通气后表达显著增强。 意义：P2X受体在低氧通气后的家兔延髓NA区的明显表达，为ATP对呼吸节律的调节提供了功能结合位点，为进一步深入研究在通气反应中，机体感受Po2、Pco2和氢离子浓度变化后，如何将信息传入呼吸中枢提供了一条新途径。

目录

论文说明:符号说明

声明

前 言

材料和方法

1.电生理学试验

2 延髓疑核免疫组织化学实验

实验结果

讨 论

结 论

附 图

参考文献

攻读学位期间发表的文章

致 谢